Atlas Citopatologia Ginecológica 45545p

Atlas de microbiologia

Acadêmica Jessica Dornelles Disciplina de microbiologia clinica

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Sumário Introdução ------------------------------------------------------------------------ 3 Meios de cultura em microbiologia----------------------------------------- 4-6 Coloração de gram – fluxograma -------------------------------------------- 7 Coloração de Ziehl Neelsen- fluxograma ----------------------------------- 8 Meios para prova de identificação ------------------------------------------ 9-12

Gênero Staphylococcus -------------------------------------------------------- 13 Esquema de identificação de cocos Gram positivos ------------------- 14-18 Streptococcus -------------------------------------------------------------------- 19-21 Esquema sorológico de grupagem de Lancefield ------------------------ 22-27 Enterococcus ---------------------------------------------------------------------- 28-32 Shigella sp -------------------------------------------------------------------------- 33-35 Salmonella sp --------------------------------------------------------------------- 36-38 Escherichia coli ------------------------------------------------------------------- 39-40 Klebsiella pneumoniae --------------------------------------------------------- 41-42 Proteus mirabilis ----------------------------------------------------------------- 43-44 Proteus vulgaris ------------------------------------------------------------------ 45-46

Enterobacter cloacae ----------------------------------------------------------- 47-48 Enterobacter aerogenes ------------------------------------------------------- 49-50 Fluxograma de identificação das enterobacterias ---------------------- 51 Pseudomonas aeruginosa ---------------------------------------------------- 52-53 Acinetobacter baumannii ----------------------------------------------------- 54-55 Neisseria gonorrhoeae -------------------------------------------------------- 56-57 Neisseria meningitidis --------------------------------------------------------- 57-58 Secreções vaginais ------------------------------------------------------------- 39-63 Referencias bibliográficas ----------------------------------------------------- 64

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Introdução A microbiologia estuda os principais agentes microbiológicos causadores de patologias no ser humano. Os

profissionais da área da saúde devem ter

conhecimento quanto aos agentes causadores de doenças infecto- contagiosas, com o dever de saber isolar e identificar estes microrganismos relacionando os sinais e sintomas com as provas bioquímicas e morfologia do crescimento bacteriano. Neste trabalho mostrarei a morfologia das colônias dos principais microrganismos envolvidos em patologias e isolados na microbiologia laboratorial, com imagens do microrganismo incubado em diferentes meios de cultura, suas principais características e as principais patologias associadas, imagens de como se apresenta no gram e como realizar sua identificação laboratorial.

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Meios de cultura em microbiologia Agar sangue (AS)–meio rico e não seletivo, diferencial para a hemólise, nele crescem a maioria dos Gram negativo e Gram positivo, além de fungos filamentosos(bolores) e leveduras, exceto algumas espécies de hemófilos e outros fastidiosos.

Ágar Thayer Martin Modificado (TMM)–meio seletivo pela adição de colistina, vancomicina e nistatina. Inibe crescimento de enterobactérias, Gram positivos, fungos e algumas espécies de Neisserias saprófitas. Enriquecido com a adição de complementos para a recuperação de N.Meningitidis e N.gonorrhoeae.

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Agar chocolate (AC) –meio rico e não seletivo, permite o crescimento da grande maioria das bactérias aeróbias e facultativas. Quando incubado em CO2 dá e também ao crescimento dos microaerófilos. Pode-se observar halos esverdeados com colônias alfa-hemolíticas. À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos.

ÁGAR CLED –CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT: usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina. A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus. Empregado para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. NTERPRETAÇÃO Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul.

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Agar MacConkey (MC)–meio seletivo para Gram negativo e diferencial para a utilização de lactose. O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente Enterococos e Estafilococos. •Lactose positiva–coloração avermelhada. •Lactose negativa–coloração inalterada. •Como exceção, eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e Bacillus.

Ágar Salmonela-Shigella (SS)–meio seletivo para Salmonela e Shigella e diferencial para a utilização de lactose (coloração rósea) e produção de H2S (coloração negra); possuem componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos.

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Meios para provas de identificação Agar citrato: Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono; Sais de amônia  alcalinizando o meio, FUNÇÃO Diferenciar gêneros e espécies de Enterobactérias e não fermentadores.

ÁGAR TSI – TRIPLO AÇÚCAR FERRO

Este meio contém três açúcares: 0,1%glicose, 1,0% lactose, 1,0% sacarose, vermelho de fenol para detecção da fermentação de carboidratos e sulfato de ferro para detecção da produção de sulfato de hidrogênio (indicado pela cor preta na base do tubo); A fermentação é indicada pela mudança da cor do indicador de pH de vermelho para amarelo. O ágar fundido é deixado solidificar, formando uma superfície inclinada; Essa configuração origina duas câmaras de reação dentro do mesmo tubo; A porção inclinada ou bico, exposta em toda sua superfície ao oxigênio atmosférico, é aeróbia. A porção inferior, denominada profundidade ou fundo, está protegida do ar e é relativamente anaeróbia; FUNÇÃO Diferenciar bacilos Gram negativos com base na fermentação de carboidratos, produção de sulfato de hidrogênio e gás.

TSI - LEITURA

Reações ápice/base: Púrpura/amarelo = fermentação apenas da glicose (lactose e sacarose negativos); Amarelo/amarelo = fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açucares); Presença de gás (CO²) = bolhas ou meio fragmentado; H²S positivo = presença de precipitado negro;

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Ureia: Determinar a habilidade do microrganismo de degradar a uréia em duas moléculas de amônia pela ação da enzima urease;

Positivo  na alcalinização do meio; Função BGN fermentadores e não fermentadores  Staphylococcus e Haemophilus

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PARA TESTE DE MOTILIDADE A bactéria é móvel  flagelo; Flagelos ocorrem nos bacilos Gram negativos, poucas formas de cocos são móveis; FUNÇÃO Determinar se o microrganismo é o não móvel; Meios associados a outros testes: -SIM (Sulfato, Indol, Motilidade); -MILI (Motilidade, Indol, Lisina); -MIO (Motilidade, Indol, Ornitina) utilizados para testes enterobactérias;

Indol + Motilidade: -

PARA PROVA DE TOLERÂNCIA AO NaCl 6,5% A tolerância ao NaCl a 6,5% é uma prova utilizada para verificar a capacidade de alguns microrganismos crescerem em presença do sal; Meio base utilizado é o BHI caldo, que é um meio nutritivo de uso geral, empregado para o cultivo de muitas bactérias;

FUNÇÃO Separa Enterococcus spp., que são NaCl 6,5 % positivo dos demais Streptococcus spp., que são NaCl 6,5% negativos; Na identificação de bacilos Gram negativos não fermentadores.

Meio THI a direita sem inoculo, a esquerda já com inoculo e turvação.

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Meio LIA (Ágar lisina ferro) Este meio contém como indicador o púrpura debromocresol: Ácido: cor amarela -- pH < 5.2 Neutro a básico: cor púrpura -- pH = 6.8 Resultado POSITIVO: purpura/ purpura: descarboxilização lisina + purpura/ amarelo: lisina – vermelho/ amarelo: desaminação lisina +

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Morfologia das colônias bacterianas ApÓs o crescimento bacteriano em placa com meio de cultura podemos visualizar colônias que possuem características próprias do microrganismo isolado, estas características mudam conforme o meio de cultura utilizado, porem a morfologia vista apresenta-se a mesma, como por exemplo a klebsiela pneumoneae que possui colônias com aspecto mucoide, característico da bactéria. A formação das colônias podem ser dividas quanto a forma, elevação e margens, segundo a imagem abaixo.

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Familia Micrococcaceae Gênero sthaphylococcus São células esféricas com 0,5 -1,5 μm de diâmetro; apresentam-se em arranjos individuais, aos pares e em agrupamentos irregulares. São Gram positivos; imóveis; não esporulados; aeróbios ou anaeróbios facultativos; quimiorganotróficos com metabolismo respiratório e fermentativo. São geralmente encontrados na pele e em mucosas do homem e de outros animais As colônias são geralmente opacas, podendo variar sua coloração (branca, creme, amarela ou laranja); geralmente catalase positiva com citocromo presente, mas geralmente oxidase negativa. O teste de nitrato é geralmente reduzido a nitrito. Suscetível à lise pelo lisostafina, mas não à lisozima; geralmente são halotolerantes (crescem a 10% de sal). A temperatura ótima varia entre 30ºC a 37ºC.

(a)

(a) Coloração de gram de Staphylococcus, cocos G+ (b)

(b) Colônias de Staphylococcus aureus. 14

Staphylococcus aureus • Cocos Gram + • Coagulase positiva • Catalase positiva • Sensível a NOVABIOCINA • Colônias amarelas ou brancas. Pode ser encontrado na região da nasofaringe e também nas fossas nasais. Causa: Foliculites, Furúnculo, Impetigo.

(a)

(b)

(b) Colônias de Staphylococcus aureus.

(a) Gram do Staphylococcus, cocos G+

(c)

(c) Colônias de Staphylococcus aureus com coloração amarelo ouro característica.

(d)

(d) Colônias de Staphylococcus aureus em ágar sangue com coloração branca. 15

Staphylococcus epidermidis • Cocos Gram + • Catalase + • Colônias brancas • Coagulase – • Sensível a NOVABIOCINA Faz parte da flora normal da pele e da mucosa de seres humanos e animais superiores. CAUSA: endocardite de válvulas cardíacas naturais, infecções produzidas por cateteres endovenosos, bacteremia.

(a)

(a) Gram Staphycoccus.

(b)

(c)

(b) Colônias de Staphylococcus epidermidis em ágar sangue.

(c) colônias de Staphylococcus epidermidis em ágar sangue, são mais pequenas e não são hemolíticas 16

(a)

( a) Comparação entre colônias de Staphylococcus aureus e S. epidermidis em ágar sangue.

(b)

(b) Teste de coagulase, diferencia S. aureus de S. epidermidis, S. aureus forma coagulase.

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Staphylococcus saprophyticus • Cocos Gram + • Colônias brancas • Coagulase – • Resistente a NOVABIOCINA Faz parte da microbiota normal da região periuretral do homem e da mulher e da pele. Causa: infecção urinaria aguda, uretrites.

(a)

(a) Staphylococcus saprophyticus em ágar sangue, mostrando resistência a novabiocina. (b)

(b) Colônias de S. saprophyticus em ágar sangue. 18

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Catalase Emulsionar uma alçada de uma colônia típica em uma gota de água oxigenada (peróxido de hidrogênio) em uma lâmina de vidro . Observar a ocorrência de borbulhamento imediato (teste positivo) ou não (teste negativo).

Coagulase Transferir 3 mL de cada cultura obtida em BHI, para um tubo estéril em seguida adicionar 3 mL de Coagulase plasma-EDTA (plasma de coelho com EDTA). Misturar com movimentos de rotação, sem agitar os tubos para não interferir na coagulação. Incubar a 35-37°C e observar ao final de seis horas se há formação de coágulo firme que não se rompe quando o tubo é virado para baixo Quando ocorre a coagulação, considera-se teste de coagulase positivo.

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DNAse O Ágar Dnase Teste Base sem DNA é usado pela detecção da atividade da desoxirribonuclease de bactérias e fungos e particularmente da identificação de Staphylococcus patogênicos. Dissolver 40 gramas em 1000 mL de água destilada em seguida adicionar 2 gramas de DNA, 0.025 gramas de azul de bromotimol e 10 gramas de manitol. Ferver para dissolver o meio completamente. Esterilizar autoclavando entre 12 e 15lbs de pressão entre 118 e 121ºC por 15 minutos. Resfriar até 45°C e despejar em placas de Petri estéreis.

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Familia streptococcaceae gênero streptococcus Os estreptococos são bactérias Gram-positivas em forma de cocos que se dividem em apenas um plano. Como as bactérias não se separam facilmente após o plano de divisão, elas tendem a formar cadeias e, assim, podem diferenciar-se dos estafilococos que comumente se dividem em diferentes planos formando grupamentos semelhantes a cachos de uva. Características: • Cocos gram positivos • Imóveis • Catalase negativa • Variam de ovóides a esféricos • Ocorrem em pares ou cadeias • Anaeróbios facultativos • Crescem em presença de O2 • Necessitam de meio enriquecido • Oxidase negativa (a)

(a) Microscopia mostrando cadeias de Streptococcus. (b)

(b) Coloração de gram de Streptococcus, mostrando suas cadeias longas.

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Padrão de Hemólise

Hemólise alfa: hemólise parcial ao redor das colônias, ainda existindo hemácias íntegras. Possui diâmetro maior do que a beta.

Hemólise beta: significa hemólise total ao redor das colônias. Embora com diâmetro menor que a alfa, é mais intensa.

Hemólise gama: ausência total de hemólise.

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Estreptococcus pyogenes beta-hemolítico do grupo A Cocos Gram positivos de 1 a 2 mm de diâmetro –cadeias, formam Colônias brancas com β hemólise halo claro em volta de suas colônias de hemólise. são imóveis e crescem otimamente a 37ºC e são inibidos em alta concentração de glicose. As colônias são geralmente transparentes ou translucidas e sua superfície é brilhante ou fosca, são convexas e tem bordas continuas. O halo da hemólise é geralmente 2 a 4 vezes maior que a colônia. Causa: faringite, escarlatina, sepse, pneumonia.

(a)

(a) Colônias de Streptococcus pyogenes em ágar sangue, apresentando o padrão β hemólise. (b)

(c)

(b) Colônias de Streptococcus pyogenes em ágar sangue, β hemólise.

(c) Gram de Streptococcus .

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Streptococcus agalactiae Beta hemolítico do grupo B São anaeróbios facultativos, homofermentadores. • Formam colônias maiores em meio de ágar, o halo da hemólise é menor que os demais streptococcus β hemolitcos , sendo uma hemólise mais fraca e menos evidente . • Possuem resistência aos antimicrobianos bacitracina e sulfametoxazol-trimetoprime é a única espécie de estreptococo capaz de produzir o fator CAMP Coloniza trato genital feminino. Causa: infecções maternas em recém-nascidos.

(a)

(b)

(b) Imagem bem próxima de colônias de Streptococcus agalactiae em ágar sangue.

(a) Colônias isoladas de Streptococcus agalactiae em ágar sangue.

(c)

(d)

(c) Colônias de Streptococcus agalactiae em ágar sangue.

(d) Gram de Streptococcus. 25

Streptococcus pneumoniae • Cocos gram positivos • Catalase negativos • Dispõem-se aos pares • Cocos em forma de ¨chama de vela¨ e encapsulados; • Hemólise alfa, geralmente aparece como halo verde envolta das colônias. Microbiota normal da naso e orofaringe. Causa: pneumonia , meningite. Apresenta diversos tipos de colônias, cujo aspecto depende do grau de capsulação, colônias com grandes capsulas podem ter vários milímetros de diâmetro, são muito mucoides, de cor acinzentada e podem parecer gotas de azeite sobre a superfície do ágar. (a)

(a) α-Hemólise em meio Agar sangue. Colônias de Streptococcus pneumoniae (Colônias pequenas, planas, bordas irregulares, achatadas e brilhosas).

(b)

(b) Colônias mucoides com padrão alfa hemólise em ágar sangue.

(c )

(c ) colônias isoladas com alfa hemólise em ágar sangue. 26

Esquema Sorológico de Grupagem de Lancefield A classificação dos estreptococos em grupos sorológicos baseia-se nas características antigênicas de um polissacarídeo de composição variável chamado carboidrato C, localizado na parede da célula, que pode ser detectado por diferentes técnicas imunológicas como a precipitação em tubo capilar. Tomando por base esse polissacarídeo, os estreptococos foram divididos em 20 grupos sorológicos (grupos de Lancefield) designados por letras maiúsculas do alfabeto ( A, B, C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U e V). • • • • •

Grupo A (beta-hemolítico): S.pyogenes Grupo B(beta-hemolítico): S. agalactiae Grupo C (alfa-hemolítico): S.equisimilis Grupo D (gama-hemolítico):S.bovis Grupo F (beta-hemolítico): S. milleri

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Familia streptococcaceae gênero Enterococcus Constituintes do Grupo D de Lancefield, anteriormente classificadas como Streptococcus do grupo D, comumente responsáveis por infecções hospitalares. • Morfologicamente crescem em forma de diplococos ou cocos em cadeias; • Apresentam catalase negativa; • Gram positivas • Não Hemolíticos; • Fastidiosos; • Anaeróbios facultativos; • Altamente resistentes a antibióticos; • Capazes de se desenvolverem em condições variadas de temperatura e Ph; • Ótimo crescimento em 35°C a 37°C em ágar seletivo (Mueller Hinton); Microbiota normal da flora intestinal. Causa: Infecções do trato urinário, infecções de feridas, bacteremias, endocardites, infecções pélvicas (intra-abdominais).

(a)

(b)

(a) Coloração de gram de Enterococcus, mostrando cocos G+.

(b) Microscopia eletrônica mostrando diplococos.

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Enterococcus faecium Resistência ao calor em até 60°C durante 30 minutos. São anaeróbios facultativos crescentes otimamente a 35ºC . Eles crescem facilmente no meio de ágar sangue, com o surgimento de grandes colônias brancas após 24 hrs. de incubação; colónias são tipicamente não-hemolítico, mas pode ser hemolítica β α ou hemolítica, cultivada na presença de 6,5% de NaCl, sais biliares e pode tolerar hidrolisar esculina. Apesar de não ter fatores de virulência, pode causar doenças graves. Em parte, o seu papel na doença é mediada por uma combinação de fatores de virulência, tais fatores regulam a adesão de proteínas e hidrocarbonatos de aderência em células que revestem o intestino e vagina humana. normalmente isolados nas fezes de humanos e uma variedade de animais. Encontrado no intestino delgado e do trato geniturinário.

(a)

(a) Colônias de Enterococcus faecium em ágar sangue.

(b)

(b) Morfologia das colônias de Enterococcus faecium em ágar sangue. 29

Enterococcus faecalis Normalmente aparece como pequenas colônias cor de cinza, sendo que há uma ausência de células hemolisadas em torno da colônia. São encontradas como microbiota normal no intestino. Possui muita resistência a antibióticos. • Tipicamente não hemolíticos (diferencia Streptococcus ssp.) •

Resistentes ao calor (60 graus por 30 minutos)

•

Faixa de crescimento: 10 – 45 graus (ótimo: 35 graus em ágar não seletivo)

•

Colônias não dissolvem quando expostas à sais biliares (diagnóstico diferencial com Streptococcus pneumoniae)

•

Halotolerantes (NaCl 6,5%)

(a)

(c)

(a) Morfologia das colônias de Enterococcus faecalis em ágar sangue. (b)

(c) Gram de Enterococcus faecalis.

(b) Colônias em ágar sangue de E. faecalis

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Identificação de Enterococcus. Cocos gram positivos aos pares ou em cadeias.

Cocos gram positivos Cultura em ágar sangue - 37°C 24h

catalase negativo

PYR

motilidade negativo Arabinose e sorbitol

ARA – SOR +

E. faecalis

ARA + SOR -

E. faecium

pigmento

E. casseliflavus

negativo E. gallinarum

ARA + SOR +

E. avium

Detecção da produção de ácido a partir de diferentes carboidratos: arabinose (Figura 1), sorbitol (Figura 2)

(a)

(b)

(a) Teste de arabinose.

(b) Teste de sorbitol.

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Familia enterobacteriaceae gênero Shigella sp É um bacilo Gram - , imóvel, não esporulado. Colônias: Agar XLD – colónias vermelhas com 1-2 mm de diâmetro DCA – colónias incolores (S. sonnei pode produzir colónias rosa pálido devido á fermentação tardia da lactose. A shigella consegue crescer em ambientes com temperaturas entre 10 e 45ºC e têm uma temperatura óptima de crescimento (temperatura à qual a taxa específica de crescimento é máxima) de 37ºC. A shigella não se multiplica à temperatura de refrigeração mas sobrevivem durante a refrigeração e a congelação. A shigella é destruída por pasteurização. Bioquimismo: Citocromo oxidase :Negativo (10-20 seg.) Catalase:Positivo Fermentação da glicose :Positivo Fermentação da lactose :Negativo Fermentação da sacarose :Negativo Fermentação do manitol :Resultados variáveis dentro do género Produção de gás :Resultados variáveis dentro do género Urease :Negativo Libertação de H2S :Positivo Indol: resultados variáveis dentro do gênero.

(a) (b)

(a) Morfologia das colônias isoladas de Shigella sp em meio SS, são transparentes, translucidas e opacas

(b) Placa com crescimento de Shigella, em ágar macconkey, são incolores e transparentes e com aspecto esponjoso.

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(c ) (e)

(e) Gram de Shigella sp

(c ) crescimento de Shigella em ágar macconkey, aspecto esponjoso com colônias incolores e translucidas.

(d)

(e)

(d) Microscopia eletrônica de Shigella sp.

(e) Shigella fkexneri em Endo ágar.

34

Identificação de Shigella sp

Bacilos gram negativos Crescimento em macconkey 37°C 24h

Colônias incolores Lactose negativo

TSI

LIA

SIM

GLICOSE: SACAROSE: H2S: -

DESCARBOX. LISINA: -

MOTILIDADE: INDOL: + -

CITRATO neg

Shigella sp

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Salmonella sp Bacilo gram negativo , móvel, anaeróbio facultativo, não formador de esporos. Causa: Gastroenterite, febre entérica, bacteremia, estado de portador crônico assintomático e, incomumente, infecções extra intestinais localizadas (endocardite, arterite, osteomielite, entre outras). As salmonelas conseguem crescer em ambientes com temperaturas entre 7 e 48ºC e têm uma temperatura óptima de crescimento (temperatura à qual a taxa específica de crescimento é máxima) entre 35 e 37ºC. As salmonelas não se multiplicam à temperatura de refrigeração mas são extremamente resistentes à congelação. Indol: neg H2S: + Urease: neg (a) Motilidade: + Lisina descarbx: + Ornitina descarbo:+ Glicose: + Lactose: neg Sacarose: neg (a) Imagem de microscopia eletrônica de uma Salmonella.

(b) (c)

(b) Colônias de Salmonella características em ágar macconkey.

(c) Morfologia das colônias características transparentes com centro preto em meio SS.

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(e)

(d)

(e) Colônias de Salmonella enterica em Endo ágar. (d) Placa de meio SS com colônias de Salmonella características transparentes com centro negro. (g) (f)

(f) Gram de Salmonella sp

(g) Placa de ágar macconkey com crescimento de Salmonella.

(h)

(h) Salmonella enterica em Deoxycholate Citrate Agar.

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Identificação de Salmonella Bacilos gram negativos Crescimento em maconkey 37°C 24h

Colônias incolores Lactose negativo

TSI

LIA

SIM

MIO

SACAROSE – GLICOSE + H2S: +

DESCARBOX .LISINA: +

MOTILIDADE: + INDOL: -

ORNITINA DESCARBOX.: +

Salmonella

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Escherichia coli A Escherichia coli é uma bactéria na forma de bacilo Gram negativo e anaeróbia facultativa. Seu habitat primário é o trato gastrintestinal de humanos e outros animais endotérmicos . Células crescem individualmente ou em pares e algumas movem-se por meio de flagelos. Algumas estirpes de E. coli conseguem crescer em ambientes com temperaturas entre 7 e 46ºC e têm uma temperatura óptima de crescimento (temperatura à qual a taxa específica de crescimento é máxima) entre 35 e 40ºC. Causa: Gastrenterite, infecção urinária, síndrome hemolítico-urêmica , cistite, peritonite,em neonatos pode causar meningite. Indol: + Citrato: neg Gás sulfídrico: neg Urease: neg Glicose gás: + Lactose: + sacarose: variável Arginina e ornitina: variável Motilidade: variável

(a)

(c)

(a) Colônias lactose + de E.coli em ágar macconkey. Zona de bile precipitada (rosa fosco). Colônias médias, foscas, irregulares e planas. (b)

(c) Colônias de Escherichia coli em ágar macconkey.

(d )

(b) Morfologia das colônias de E. coli rosas.

(d ) diferenças entre E. coli e K. pneumoniae em macconkey

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(e)

(f)

(e) Gram de Escherichia coli.

(f) Colônias isoladas de Escherichia coli em ágar macconkey.

Identificação de Escherichia coli Bacilos gram negativos Crescimento em macconkey 37°C 24h Colônias rosas Lactose +

TSI

LIA

GLICOSE: + SACAROSE: + H2S: -

DESCARBOX. LISINA: + -

SIM MOTILIDA DE: + INDOL: +

CITRATO Neg

Escherichia coli 40

Klebsiella pneumoniae Bacilo gram-negativo aeróbio facultativo, mas com melhor crescimento em condições aeróbias, não esporulado e cujo tamanho varia de 0,3 a 1 μ de diâmetro e 0,6 a 6μ de comprimento, é imóvel, produz colônias grandes e gomosas quando cultivadas em placas com nutrientes. No ágar MacConkey, produz colônias róseas, brilhantes, com aspecto elevado e de consistência mucoide. As colônias formadas são grandes devido à cápsula mucoide polissacarídica. Fermenta glicose, reduz nitrato, lisina positiva, citrato e indol negativos, tríplice açúcar ferro (TSI) positivo com produção de gás, ornitina negativa, metaboliza a lactose, utiliza o citrato como fonte de carbono e também hidrolisa a uréia, formando gás ou não. Coloniza o trato grastrointestinal.

(a)

(d)

(d) Gram de Klebsiella pneumoniae.

(a) Colônias de Klebsiella pneumoniae em ágar macconkey.

(b) (c)

(b) Colônias mucoides de Klebsiella pneumoniae em ágar macconkey. Colônias grandes, mucoides, circulares, bordos inteiros, convexas, brilhosas e rosas.

(c) Morfologia das colônias, mucoides e de cor rosa em ágar macconkey.

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(e)

(f)

(e) Colônias isoladas de Klebsiella pneumoniae em ágar macconkey.

(f) Colônias de Klebsiella pneumoniae e Salmonella enterica em comparação.

Identificação de Klebsiella pneumoniae Bacilos gram negativos Crescimento em macconkey 37°C 24h

colônias de cor rosa Lactose +

TSI

LIA

SIM

GLICOSE: + SACAROSE: + H2S: -

DESCARBOX . LISINA: +

MOTILIDADE: INDOL: -

Klebsiella pneumoniae

CITRATO: +

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Proteus mirabilis Bacilo Gram negativo, apresentam motilidade característica em forma de ondas Não formador de esporos, não encapsulado. Esta presente na microbiota normal. Indol: neg Citrato: variável H2S: + Urease: variável Motilidade: positivo Lisina descarboxilase: neg Ornitina descarboxilase: + Glicose gás: + Lactose: neg

(a)

(b)

(b) Crescimento em véu do Proteus em ágar sangue.

(a) Crescimento de Proteus mirabilis, mostrando a motilidade em forma de ondas. (d)

(c )

(c ) colônias isoladas de Proteus mirabilis em Deoxycholate Citrate Agar.

(d) Proteus mirabilis em Deoxycholate 43 ágar.

(e)

(e) Gram de Proteus

Identificação de Proteus mirabilis Bacilos gram negativos Crescimento em macconkey 37°C 24h Colônias incolores Lactose negativa

TSI

LIA

SIM

MIO

GLICOSE: + SACAROSE: + H2S: +

DESCARBOX. LISINA: -

MOTILIDADE: + INDOL: -

DESCARBOX. ORNITINA: +

Proteus mirabilis 44

Proteus vulgaris bacilo Gram negativo, não esporulado, motilidade com característica de ondas, não esporulado. Indol: + Citrato: variavel H2S: + Urease: + Motilidade: + Lisina descarboxilacao: neg Orinitina descarboxilacao: neg Glicose: variavel Lactose: neg

(a)

(a) Colônias de Proteus vulgaris em ágar sangue. (b) (c)

(b)

(b ) comparação entre as colônias de P. mirabilis, salmonela enterica e E. coli

(c) Crescimento de Proteus vulgaris. 45

(d)

(d) Colônias de Proteus vulgares em ágar macconkey.

Identificação de Proteus vulgaris Bacilo gram negativo crescimento em macconkey 37°C 24h

Colônias incolores Lactose negativa

TSI GLICOSE: + SACAROSE: + H2S: +

LIA

SIM

MIO

DESCARBOX. LISINA: -

MOTILIDADE: + INDOL: +

DESCARBOX. ORNITINA: -

Proteus vulgaris

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Enterobacter cloacae Bacilo gram negativo, anaeróbio facultativo, flagelado. Oxidase negativa e catalase positiva. Habita naturalmente o trato gastrointestinal humano. São patógenos hospitalares, causando infecções oportunistas. Causa: bacteremia, infecções do trato respiratório inferior, infecções da pele e dos tecidos moles, infecções do trato urinário, endocardite, infecções intra-abdominais, artrite séptica, osteomielite, e infecções oftálmicas. Indol: negativo Citrato: + H2S: + Lactose: variável Urease: variável Motilidade: + Lisina descarbo. : negativo Ornitina descarb.: + Glicose: + Sacarose: + (a)

(b)

(a) Colônias de Enterobacter cloacae, lactose +, em ágar macconkey.

(b) Colônias de Enterobacter cloacae. (d)

(c)

(c) Aspecto das colônias em ágar macconkey.

(d) Gram de enterobacter.

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Identificação de Enterobacter cloacae Bacilos gram negativos crescimento em ágar macconkey. 37°C 24h

Colônias de cor rosa ou incolores. Lactose + ou -

TSI

LIA

SIM

GLICOSE: + SACAROSE: + H2S: -

DESCARBOX. LISINA: -

MOTILIDADE: + INDOL: -

CITRATO +

Enterobacter cloacae

48

Enterobacter aerogenes Bacilo gram negativo, anaeróbio facultativo, flagelado. Bactéria da flora intestinal. Causa: bacteremia, osteomielite e artrite séptica, assim como as infecções do trato urinário, trato gastrointestinal, trato respiratório e da pele. Indol: negativo Citrato:+ H2S: negativo Urease: negativo Motilidade: positiva Lisina descarb.: + Ornitina descarb.: + Glicose: + Lactose: + Sacarose: +

(a)

(b)

(a) Colônias de Enterobacter aerogenes.

(b) Colônias de Enterobcater aerogenes.

(c)

(c) Gram de Enterobacter. 49

Identificação de Enterobacter aerogenes Bacilos gram negativos crescimento em macconkey 37°C 24h Colônias de cor rosa. Lactose positiva

TSI

LIA

SIM

GlLICOSE: + SACAROSE: + H2S: -

DESCARBOX. LISINA: +

MOTILIDADE: + INDOL: -

CITRATO: +

Enterobacter aerogenes

50

51

Bacilos gram negativos não fermentadores Pseudomonas aeruginosa • Bactéria aeróbica, se apresenta em forma de bacilo gram negativo. • Não fermentadora e oxidase positiva. • Não esporulada e possui um único flagelo polar. Encontrado naturalmente no solo, água, vegetais, animais, nos alimentos. Também é encontrado em ambientes hospitalares. Causa: infecções oculares, otite, foliculite, infecções em queimaduras. Indol: negativo hemolise: positivo Lactose: negativo Motilidade: positivo (a)

(b)

( a) Pigmento verde difusível de Pseudomonas aeruginosa. Colônias médias, brilhosas, pouco mucoides, bordos irregulares e translúcidas. (c )

(b) Colônias de pseudomonas aeruginosa em aguar macconkey.

(d)

(c ) colônias de pseudomonas aeruginosa em aguar sangue.

(d) Gram de pseudomonas aeruginosa.

52

(e)

(e) Colônias de Pseudomonas aeruginosa em ágar macconkey

Identificação de Pseudomonas aeruginosa Bacilo gram negativo semeadura em placa

Incubação a 42°C Crescimento -

Outra espécie de Pseudomonas

Crescimento +

crescimento com morfologia característica, coloração esverdeada e odor de uvas verdes.

Pseudomonas aeruginosa

Oxidase: + 53

Acinetobacter baumannii • Bactéria aeróbica; • Gram-negativa; • Não fermentadora, sendo oxidase-negativa. Possui forma de cocobacilos gram negativo, porem quando sua fase de crescimento termina ela adquire um formato mais curto e arredondado, parecendo com cocos. • Sua motilidade é reduzida. A .baumannii é uma bactéria encontrada naturalmente no solo e na água. Causa: pneumonia nosocomial, infecção em feridas, é oportunista. Citrato: + Hemólise: negativa Oxidase: negativa Motilidade: negativa

(a)

(b)

(a) Coloração de gram de Acinetobacter.

(b) Colônias de Acinetobacter. (c )

(d)

(c) Colônias de Acinetobacter em ágar sangue.

(d) Acinetobacter no ágar macconkey.

54

Identificação de Acinetobacter baumannii

Cocobacilos gram negativos semeadura em meio de cultura 37°C 24h

Em ágar sangue produz hemólise

Motilidade: -

Oxidase: -

OF glicose: oxidativo

Acinetobacter baumannii

Citrato : +

55

Neisseria gonorrhoeae Diplococos gram-negativos com fastidiosas exigências de crescimento. Oxidase e catalase positivo; produção de acido a partir da degradação oxidativa da glicose. • Cresce melhor de 35 a 37o C em atmosfera úmida suplementada com CO2. Causa: gonorreia

(a) (b)

(a) Gram de secreção uretral, mostrando a presença de diplococos gram-negativos, observa-se a presença destes dentro dos leucócitos.

(b) Coloração de gram com presença de diplococos gram-negativos.

(d) (c)

(c) Colônias de neisseria gonorrhoeae em ágar sangue.

(d) Colônias de neisseria gonorrhoeae em ágar chocolate

56

(a)

(a) Colônias de neisseria gonorrhoeae em placas de ágar chocolate (a esquerda) e ágar sangue (a direta), ambas com 48 horas de incubação.

Neisseria meningitidis Diplococos gram-negativos com fastidiosas exigências de crescimento. Oxidase e catalase positivo; produção de acido a partir da degradação oxidativa da glicose. • Cresce melhor de 35 a 37o C em atmosfera úmida suplementada com CO2. Sua identificação é feita através do isolamento em LIQUOR. Causa: meningite meningocócica. (b)

(b) Coloração de gram de LIQUOR, apresentando diplococos gram negativos. (c)

(c) Colônias de neisseria meningitidis em ágar chocolate, a esquerda com crescimento após 24 horas de incubação, a direita após 48 horas de incubação, a direita as colônias são maiores e com coloração marrom.

57

Identificação de Neisseria LIQUOR

SECREÇÃO URETRAL/VAGINAL Diplococos gram positivos no interior de leucocitos crescimento fastidioso, requer meio e condições de incubação ideais..

CATALASE +

CATALASE +

OXIDASE +

OXIDASE +

GLICOSE: + MALTOSE: +

Neisseria meningitidis

GLICOSE: + MALTOSE: -

Neisseria gonorrhoeae

58

Secreções vaginais Vaginose bacteriana:

É uma síndrome de etiologia polimicrobiana causada por Gardnerella vaginalis associada a bactérias anaeróbias,principalmente Mobiluncus spp; Clinicamente: secreção homogênea com odor fétido;

(b) (a)

(a) Clue cell, celula recoberta por Gardnerella.

(c)

(b) Comparação entre célula normal e uma clue cell.

(d)

(c) Nas setas as clue cells, celulas epiteliais revestidas de Gardnerella.

(d) Celulas com Gardnerella , clue cell.

59

(e)

(e) Mobiluncus sp em secreção vaginal.

Diagnóstico laboratorial • pH vaginal > 4.5, • odor desagradável após a adição de KOH a 10% à secreção • Coloração pelo Gram: ausência ou diminuição de leucócitos e de lactobacilos, presença de “clue cells”, grande quantidade de bacilos Gram variáveis •Cultura: isolamento em meio seletivo •Pesquisa através de sondas de DNA

60

Candidíase : é causada por um fungo, as espécies de Cândida mais frequentemente envolvidas com vaginites são: C. albicans (80%), C. glabrata (10 a 16%), C. tropicalis (5%). Clinicamente:prurido,secreção vaginal branca com aspecto de leite talhado.

(a)

(b)

(b) Hifas de Candida .

(a) Candida em secreção vaginal a fresco, é possiveil ver leveduras, pseudo-hifas e hifas.

(b)

(c)

(b) Gram mostrando hifas, leveduras e pseudo-hifas.

(c) Hifas de candida coradas com gram em secreção vaginal.

61

Tricomoníase: causada pelo agente Trichomonas vaginalis , é um parasita e considerado como DST. Clinicamente: secreção homogênea abundante, odor fétido e prurido.

(b)

(a)

(a) Trichomonas vaginalis em secreção vaginal. (b) Trichomonas vaginalis em secreção vaginal.

(c)

(c) Ao centro um Trichomonas vaginalis, pode-se notar muitos leucócitos no campo.

62

Vaginose citolitica: Condição que resulta de um crescimento exacerbado de lactobacilos, diminuição do pH; Clinicamente: prurido,dispareunia,disúria vulvar e secreção vaginal branca não grumosa. Sintomas são cíclicos e mais pronunciados na fase lútea do ciclo. Pode estar associado com estresse; (a)

(a) Células escamosas com bacilos de Doderlein em seu interior.

(b)

(b) Células escamosas com bacilos de Doderlein em seu interior..

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Referencias bibliográficas

Imagens retiradas de fontes do google imagens. enterococcus-faecium.blogspot.com http://www.vetbact.org/ medicineforstudents.blogspot.com.br Santos, Daniella Fabíola dos. Características microbiológicas de Klebsiella pneumoniae isoladas no meio ambiente hospitalar de pacientes com infecção nosocomial / Daniella Fabíola dos Santos. – 2006.

translate.google.com.adoptamicrobe.blogspot.com.br/2006_12_01_archive.html s.med.up.p www.fapi.br/conteudo/conteudo_programatico/farmacia/sp-neisseria_guilherme-silvia.pdf www.chemicalpics.com/enterobacter-aerogenes-on-macconkey-agar wikidenteshigella.blogspot.com www.todabiologia.com www.interlabdist.com.br www.uftm.edu.br

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