Report: Gram Staining Of Staphylococcus Aureus And Escherichia Coli 5a1qg

     

MICROBIOLOGY  MB102b       

LAB REPORT #4:  

Gram staining of ​Staphylococcus aureus​ and  Escherichia coli       

Muhammed Sayed Hassan  ID: 171741  GROUP (F)   

Submitted to: L.A.​ Suzanne ali   

  Gram staining of ​Staphylococcus aureus​ and  Escherichia coli

 

INTRODUCTION  This lab covered ​smear preparation of ​Staphylococcus aureus ​and 

Escherichia coli​ ​on the microscopic slide with the ​heat fixation ​method,  Then ​gram staining both bacteria with a Primary stain, Mordant, 

Decolorizing agent, and a counterstain.​  Then identifying its color under the  light microscope​. The gram staining method depends on the properties of the  gram-negative and gram-positive peptidoglycan layers, Outer membrane and  LPS content which all cause a different gram reactions. ​Aim of the lab was to  differentiate between gram-negative bacteria and gram-positive bacteria with gram  staining.   

MATERIALS  Chemical agents:   1. Immersion oil  2. Crystal violet  3. Gram's Iodine  4. Ethanol (95%)  5. Safranin  6. Distilled water  7. Ethanol (70%) 

Biological agents:   1. Staphylococcus aureus  2. Escherichia coli  

Equipments:   1. Light Microscope  2. Microscopic slide  3. Aluminium foil sheet  4. Inoculation loop   5. Bunsen burner 

  PROCEDURE  a) Smearing of bacteria  1. 1 drops of water was put on the microscopic slide.  2. The inoculation loop was sterilized by bunsen burner.  3. 1 loopful was put on the microscopic slide.  4. The bacteria was smeared on the slide.    b) Heat fixation of bacteria   5. The bacteria was heated with bunsen burner with indirect flame fixation.    c) Gram staining of bacteria  6. The microscopic slide was put on the aluminium foil sheet.  7. 2 drop of ​Crystal violet ​were dropped on the smear for 1 minute.  8. Microscopic slide was rinsed gently with distilled water.  9. 2 drops of ​Iodine ​were dropped on the smear for 2 minutes.  10. Microscopic slide was rinsed gently with distilled water.  11. The slide was decolorized with ​ethanol​ for 30 Seconds.   12. Then microscopic slide was rinsed gently with distilled water.  13.  2 drops of ​Safranin ​were dropped on the smear for 1 minute.  14. Microscopic slide was rinsed gently with distilled water.  15. Then the slide was drought for about 10 minutes before examination.     d) Microscopic examination of the slide  16. 1 drop of immersion oil was dropped on the slide.  17. The slide was put in the microscopic clip.  18. Knob was zoomed until the lens touched the oil concave surface.

 

19. Then the slide was examined with the Oil lens.      NOTE:​ Repeat the same procedures for the two bacteria: ​Staphylococcus aureus​ and  Escherichia coli. 

RESULTS   

Fig(1):​ Gram positive stain of ​Staphylococcus

aureus bacteria​ shown under a light ​ microscope.

F ​ ig(2):​ Gram negative stain of E.coli ​ bacteria shown under a light microscope.

DISCUSSION  Above fig(1) shows gram positive stain ​Staphylococcus aureus​ bacteria gave (Violet)  color under light microscope using oil-immersion lens. Fig(2) shows gram negative  stain ​Escherichia coli​ bacteria which gave (red-pink) color using the same lens for  fig(1).    

CONCLUSION  The aim of the lap was successfully achieved which is differentiating between gram  positive and gram negative bacteria through gram staining.