Coproparasitoscopico 6b3r71

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

MÉDICO CIRUJANO

MÓDULO V APARATO DIGESTIVO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA PRÁCTICA 19 EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS

OBJETIVOS Conocer

la importancia del diagnóstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias.

Identificar

las formas parasitarias mediante la observación al microscopio. Conocer

la clasificación de los exámenes coproparasitoscópicos

Reactivos - Sacarosa (azúcar común).

1.- Solución de sacarosa con densidad de 1.180. 2.- Lugol parasitológico (ver método directo).

Método cualitativo de concentración por flotación simple

Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como huevos, quistes y larvas. La densidad tan elevada de la salmuera distorsiona las formas parasitarias y se necesita experiencia para la lectura.

Reactivos - Cloruro de sodio comercial.

Solución de lugol parasitológico

Solución saturada de cloruro de sodio.

1.- Se hace una suspensión homogénea con 1 a 2 g de materia fecal y 10 ml de agua de la llave. 2.- Se pasa a través de gasa colocada en el embudo y colectando la suspensión directamente en el tubo de ensaye.

3.- Los tubos así preparados, se centrifugan a 2,000 revoluciones por minuto (r.p.m.) durante un minuto. 4.- Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua, agitando con un aplicador. 5.- Se centrifuga nuevamente y se vuelve a decantar el sobrenadante.

6.- Se agregan 2 a 3 ml de la solución de sulfato de zinc a los tubos y se homogeneizan perfectamente, llenando los tubos hasta 0.5 a 1 cm. por abajo de los bordes. 7.- Se centrifuga a 2000 r.p.m. durante un minuto. 8.- Con el asa estéril o flameada, se recoge la muestra de la película superficial, que se encuentra en el menisco, durante dos o tres ocasiones sucesivas y se deposita en un porta objetos.

9.- Se agregan dos gotas de lugol parasitológico y se homogeneiza con el ángulo de un cubreobjetos y se coloca este sobre la preparación. 10.- Se observa la preparación al microscopio con objetivos 10X y 40X.

TÉCNICAS CUALITATIVAS

1.- Suspender 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de utilizando la cápsula de porcelana para homogeneizar.

" Carles l ",

2.- Pasar la suspensión a través de la malla o gasa. 3.- Centrifugar a 1,800 r.p.m. durante 1 minuto. 4.- Decantar y agregar al sedimento " Carles II ", hasta llenar dos tercios del tubo. 5.- Agitar con fuerza y añadir el éter hasta centímetro y medio del borde. 6.- Tapar el tubo con el tapón de caucho y agitar violentamente hasta lograr la homogeneización de las sustancias que contiene.

8.- Con un palillo de dientes, se rompe el tapón de las heces, grasas y otros restos, agitando ligeramente con el palillo. 9.- Se vuelve a centrifugar durante otros 30 seg. a 1,800 r.p.m. 10- Se rompe nuevamente el tapón superior de restos fecales, desprendiéndolo de la pared del tubo con cuidado, ayudándose del palillo. 11- Se decanta de una sola vez, procurando que quede una pequeña cantidad de 2 a 4 gotas líquidas junto al sedimento. 12- Agregar al sedimento una gota de lugol y agitar el tubo ligeramente para homogeneizar. 13- Con la pipeta Pasteur, se toma una gota de la suspensión coloreada del fondo del tubo y se coloca en el portaobjetos, colocando sobre este el cubreobjetos. 14- Se observa en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

1.- Se coloca un fragmento de heces fecales del tamaño de un frijol ( 1 g aproximadamente) en un vaso que contenga 5 a 10 ml de ácido clorhídrico al 15 %. 2.- Se homogeneiza con el aplicador. 3.- Se pasa la suspensión por dos capas de gasa previamente humedecida, recibiendo el colado en el tubo de centrífuga cónico de 15 ml. 4.- Se añade éter en cantidades iguales y se coloca un tapón de caucho. 5.- Se agita vigorosamente y se afloja el tapón para disminuir la presión y se destapa. 6.- Se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto. 7.- Se saca de la centrífuga y se observan 4 capas: 1a.- Eter. 2a.- Tapón de restos fecales. 3a.- Capa de ácido. 4a.- Sedimento inferior que contiene formas parasitarias.

8.- Se mantiene el tubo horizontal y con un aplicador de madera y con movimientos circulares, se despega el tapón de restos fecales. 9.- Rápidamente, pero con cuidado, se vierten el éter, tapón de restos fecales y la capa de ácido, de manera que quede el sedimento en el tubo. 10- Se mantiene el tubo en posición horizontal, para evitar que los restos de extracto graso y de tapón fecal bajen por las paredes del sedimento. 11- Se introduce un aplicador con hiposo de algodón y se limpian las paredes del tubo.

12- Con el tubo vertical, se toma parte del sedimento con una pipeta Pasteur. 13- Se coloca en un portaobjetos y se pone un cubreobjetos por encima de este. 14- Se examina en el microscopio con objetivo seco débil 10X y seco fuerte 40X.

Se han descrito trofozoitos

Técnica permite hacer una buena concentración de huevos, quistes y larvas,

Se pueden destruir con el éter a pesar de que hayan sido previamente fijados y conservados con el MIF.

REACTIVOS Éter etílico., Merthiolate., Yodo de potasio. Formaldehído. Glicerina. Y agua destilada.

1.-

2.-

SOLUCIONES - Solución de MIF.

3.-

•Mezclar la muestra fecal con la solución de MIF y pasarla a través de gasa humedecida en MIF a un tubo cónico de centrífuga •Se agregan 5 ml de éter, se tapa y agita

•Se retira el tapón con cuidado y se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto. •Se forman 4 capas: •1a.- Eter. 2a.- Restos fecales. •3a.- Solución MIF. 4a.- Sedimento con las formas parasitarias •Se desprende el tapón superficial y se decantan las tres capas superiores, •Con una pipeta Pasteur se toma la muestra de la parte superior del sedimento, se coloca en un portaobjetos y se cubre. •Se examina en el microscopio con objetivos de seco débil y seco fuerte.

" EXAMENES COPROPARASITOSCOPICOS CUANTITATIVOS "

MATERIALES

REACTIVOS

- Hidróxido de sodio Q.P.

- Agua destilada.

SOLUCIONES

- Solución 0.1\ N de Hidróxido de sodio

El equipo y material que se utiliza no se puede conseguir fácilmente en el comercio.

1.- Se pesa un frasco de boca ancha con un abatelenguas. 2.- Se pone materia fecal ayudándose con el abatelenguas, hasta que sean 4 g (peso del frasco con el abatelenguas más 4 g de materia fecal). 3.- Se miden 36 ml de solución de formaldehído y se vacían en el frasco. 4.- Se homogeneiza la materia fecal con la solución de formol hasta que quede una suspensión.

5.- Se pasa la mezcla por malla o gasa previamente colocada en un embudo y se recibe la suspensión en un tubo colocado en una gradilla. 6.- Se centrifuga durante un minuto a 2,000 r.p.m..

7.- Se decanta el sobrenadante, se suspende el sedimento con agua y se vuelve a centrifugar bajo las mismas condiciones anteriores. 8.- Se decanta nuevamente el sobrenadante y se agregan 2 a 3 ml. de la solución de sulfato de zinc, se mezcla hasta hacer una nueva suspensión.

9.- Se introduce la campana de Ferreira, dando un pequeño giro. 10- Se llena el tubo con más solución, procurando que tanto el menisco interno de la campana, como el externo, vayan subiendo paralelamente. 11- Se centrifuga a 2,000 r.p.m. durante un minuto. 12- Se saca el tubo de la centrífuga y con el pulgar y el índice se comprime fuertemente el trocito de manguera de caucho del extremo anterior de la campana y de un golpe se saca ésta del tubo.

13.- Se invierte la campana sobre el portaobjetos y se homogeneiza la suspensión con el ángulo de un cubreobjetos y se coloca sobre el portaobjetos. Se examina la preparación con el microscopio a seco débil y seco fuerte (10X y 40X respectivamente)

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE HUEVOS DE ALGUNOS PARÁSITOS

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Microscopio Centrifuga Vaso de precipitados Tubos con tapón Embudo de plástico Pipetas Pasteur Varilla de vidrio Abatelenguas Asa bacteriológica Gasas

METODO DE FAUST Y COLS Poner con un aplicador 1 g de materia fecal en un vaso de precipitado, agregar 210 ml de solución salina isotónica Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en un embudo Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm

Tirar el líquido sobrenadante y añadir 2-3 ml de sedimento

agua al

Repetir la maniobra hasta que el líquido que sobrenada sea claro Agregar 8-9 ml de sulfato de zinc ; una vez tirado el sobrenadante agitar y adicionar solución hasta llenar el tubo Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm Tomar con el asa la película superficial y colocarlo en el portaobjetos, añadir una gota de lugol para teñir la mezcla, cubrir con una laminilla y observar a seco débil y seco fuerte

METODO DE RITCHIE Poner un aplicador 1g de materia fecal en el vaso de precipitados, agregar 10 ml de solución salina isotónica. Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en un embudo recibiendo en el tubo.

Centrifugar durante un minuto a 2000 rpm; desechar el sobrenadante, repetir hasta que el sedimento este limpio Agregar 10 ml de formalina al 10% y dejar en reposo 10 min

Centrifugar durante 1 min a 1500 rpm; en donde se observarán 4 capas: Eter Restos fecales Formol Sedimento

Introducir una pipeta Pasteur y extraer el sedimento; colocar una gota sobre el portaobjetos, agregar 1 gota de lugol y cubrir con una laminilla Observar a seco débil y seco fuerte