Manual Coatron M1 1p1w1e
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- Words: 9,394
- Pages: 36
MEDICAL INSTRUMENTS, PRODUCTION + TRADING GMBH
MANUAL DE OPERACION
COATRON M1 V1.07
1
INDICE
PRECAUCION
3
1. INTRODUCCION
5
2. INSTALACION 2.1 2.2 2.3 2.4
10
COMPONENTES DEL EQUIPO DESCRIPCION DATOS TECNICOS APROBACION DE LOS ESTANDARES DE SEGURIDAD
10 11 12 13
3. INSTRUCCIONES DE OPERACION
13
4. DETERMINACION DE PT
16
5. DETERMINACION DE APTT
18
6. DETERMINACION DE FIB
20
7. DETERMINACION DE TT
22
8. DETERMINACION DE FACTORES EXTRINSECOS
23
9. DETERMINACION DE FACTORES INTRINSECOS
25
10. DETERMINACION DE DIMERO-D
26
11. SERVICIO
28
FUNCIONES DE SERVICIO GUIA DE LOCALIZACION AVERIAS
28 34
12. PARTES QUE COMPONEN EL APARATO
35
13. IMAGEN TECNICA (3era. DIMENSION)
36
COATRON M1 V1.07
2
ADVERTENCIA:
Lea cuidadosamente el Manual de operación antes de utilizar el Coatron M1. Para asegurar una adecuada ejecución deberá seguir todas las advertencias y referencias para la seguridad técnica descritas en este manual. Las reparaciones del instrumento deberán realizarse por personal calificado, y deberán remplazarse las partes de acuerdo con las especificaciones del instrumento. El COATRON M1 esta diseñado para usarse con plasma humano. Así como con todos los productos derivados de sangre humana, no se conoce ninguna prueba que garantice completamente que estos productos no podrán trasmitir Hepatitis, SIDA u otras enfermedades infecciosas, por lo que el operador del instrumento deberá de tomar las precauciones apropiadas. En caso de que se derrame en el instrumento, limpie con una toalla de papel empapada con hipoclorito al 10%. El coatron M1 es fabricado por TECO GmbH. TECO GMBH Dieselstrasse D-84088 Neufahrn N.B.
MEDICAL INSTRUMENTS, PRODUCTION + TRADING GMBH Distribuidor autorizado: En México.
Laboratorios Licon S.A. Viveros del Rocio # 33 Col. Viveros de la Loma, Tlalnepantla, Edo. De Méx. C.P. 54080 México. Teléfono: 53 – 62 – 02 – 99. Fax: 53 –62 –17-92
COATRON M1 V1.07
3
Historia del Software: 1.04
Primera Liberación
1.05
Mejoramiento del control de temperatura y carga de batería
1.06
51 1s en lugar de 255 s para el cronómetro Se puede usar el % de actividad para la determinación de PT
1.07
Se desactiva el cargador de batería Se introduce corrección de OD para cada prueba Control de temperatura estabilizado
1.08
Tiempo muerto para PT/TT/FaE = 5 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para PTT/Fal = 10 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para FIB = 4.5 seg (anterior 5 seg)
1.09
Mejoramiento de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas
1.10
Nueva implementación de un sistema de control de medición completo. El interruptor de tiempo básico ahora se controla por un reloj de cristal en lugar de un reloj controlador para aislar el sistema de medición de la temperatura. Se adicionó un Sistema de chequeo en el menú. Presionando la tecla “menú” el óptico comenzará a calibrar. El valor debe estar entre 10000-14000 (se requiere un canal vacío). Presionando “UP/DOWN” la amplificación se puede cambiar manualmente. Inicio automático del óptico. Después de que el óptico esta “activo”, la determinación comenzará automáticamente cuando la señal óptica cambie (ej. al adicionar reactivo). Con reactivos muy claros (f.e. Fibrinógeno) el “Autostart” requiere una técnica de pipeteo muy rápida. Se introdujo para cada prueba una COAC-corrección. Se adapto la nueva prueba de Dímero-D.
1.11
Se mejoro la programación de los datos de calibración. Se igualaron al Coatron M2 los algoritmos para todas las pruebas. Cambio de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas.
COATRON M1 V1.07
4
1. INTRODUCCION La Hemostasis es un proceso Bioquímico para proteger al organismo de la perdida de sangre después de un daño Vascular. La Hemostasis sucede en tres fases: . La Vasoconstricción y agregación plaquetaria: disparar la cascada de coagulación.
detienen
inmediatamente
( en
segundos) y
. La cascada de coagulación: Es una reacción en cadena en la cual enzimas inactivas se convierten a su forma activa. La cascada finaliza en la conversión del fibrinógeno a fibrina por Trombina activada. En la presencia del factor XIII activado la fibrina se estabiliza y se forma un trombo insoluble ( coagulo de fibrina), el sangrado finalmente se detiene. . Para prevenir al organismo de eventos trombolíticos, la coagulación debe ser controlada muy bien. Esto se realiza por el sistema fibrinolítico. Los Inhibidores son capaces de invertir la activación de los factores y regula por lo tanto, la coagulación. Los inhibidores básicos son la Antitrombina y la Proteína C. El sistema fibrinolítico es también el responsable de romper el coagulo de fibrina. Después de la lisis del coágulo, el daño vascular esta completamente reparado. Todos los factores e inhibidores están muy cuidadosamente equilibrados. En caso de un desajuste o una disfunción, puede o podría aparecer una enfermedad vascular grave. La disfunción de la hemostasis es una de las enfermedades más comunes, la cual termina muy frecuentemente en muerte (~ por 1000). Algunos ejemplos son la trombosis venosa profunda (DVT) o embolismo pulmonar (PE). El COATRON M1 es un coagulómetro de un canal foto-óptico para determinar los parámetros básicos de la segunda etapa de la hemostasis (cascada de coagulación) en plasma humano citratado. Esta diseñado para las pruebas de coagulación in-vitro del Laboratorio Clínico. Los ensayos de Coagulación con formación de fibrina tales como los ensayos de punto final se pueden correr en el instrumento, así como ensayos inmunoturbidimétricos, como el Dímero D. LAS SIGUIENTES PRUEBAS Y SUS CARACTERISTICAS QUE ESTAN DISPONIBLES EN EL INSTRUMENTO SE ENLISTAN A CONTINUACIÓN: - PT (tiempo de Protombina) El TP se expresa en segundos (en fracciones de 100 ms para las muestras) y se normalizan automáticamente en INR (Razón de Normalización Internacional). El valor normal de TP (100%) y el ISI (Indice de Sensibilidad Internacional) se pueden almacenar a bordo. Adicionalmente el resultado se puede convertir en % de Actividad cuando los valores al 100 y 25% se almacenan en la memoria del instrumento. - APTT (Tiempo de Protrombina Parcial Activada) La APTT se reporta en segundos y se normaliza automáticamente en radio: Se puede guardar en la memoria el valor normal del APTT - TT (Tiempo de Trombina) El TT es reportado en segundos y normalizado automáticamente en radio. El valor normal de TT se puede almacenar en la memoria.
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5
- FIB (Fibrinógeno). El FIB se reporta en segundos y se convierte automáticamente a una concentración plasmática en mg/dL. Es necesario construir una curva de calibración para obtener los resultados en mg/dL. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. - FaE (Factores de vía Extrínseca, FII, FV, FVII, FX) - FaI ( Factores de vía Intrínseca, FVIII, FIX, FXI, FXII) Los factores de la coagulación son reportados en segundos y convertidos automáticamente en % de actividad en plasma. Se requiere una calibración para obtener los resultados en %. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. -
Dímero D
El valor de Dímero D cuantitativo se puede almacenar utilizando el equipo de TECO Blue Dímero D. rango: de 100 a 3200 ng/mL (lineal). Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. Se recomienda correr una curva de calibración con un estándar de 1600 y 200 ng/mL. General: Todas las pruebas se llevan a cabo con una cuarta parte de los volúmenes regulares de reactivo y de muestra. La microcubeta debe usarse con un mínimo de 75 µL → por ejemplo 25 µL de muestra + 50 µL de reactivo de Tromboplastina para TP.
El COATRON M1 soporta una Interfase unidireccional RS232 (valores fijos a 2400, 8, 1, No). Si la interfase está en modo de impresión, se imprimirán automáticamente todos los resultados. El RS 232 también puede colocarse para modo debug. Por lo que se pueden enviar los datos ópticos a una terminal de PC, donde se visualiza la reacción de coagulación.
El COATRON M1 cuenta con un área de incubación para 6 muestras y 2 posiciones para el reactivo. Al encender tardara de 3-5 minutos para alcanzar la temperatura de 37°C, lo cual se indicará con una luz verde.
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6
TEORIA DEL FUNCIONAMIENTO. El COATRON M1 es un fotómetro de 1 canal altamente sensible. Un intenso láser óptico a 470 nm asegura resultados exactos y precisos, aún con el empleo de muestras ictéricas o lipémicas. La señal receptora es detectada y convertida a una corriente eléctrica. Durante la prueba el sistema busca la mejor señal de amplificación, por lo tanto pueden emplearse una gran variedad de reactivos ( por ejemplo tromboplastinas muy turbias o reactivos muy claros). Adicionalmente el software está basado en la densidad óptica (extinción) , la cual absorbe los efectos de la luz externa. CUVETTE
PLASMA + REAGENT LASER DETECTOR
DS I PLAY
M c i ro C - on tro le l r
PR N I TER
Figura 1 - El Principio de Detección. El Plasma y el reactivo absorben la luz láser transmitida. La medida de absorbancia se obtiene por el detector y lo envían al microcontrolador. Aquí el programa analiza la señal y envía el resultado a la pantalla y a la impresora (opcional).
METODO DE TURBIDEZ (METODO DE COAGULACION) La conversión de fibrinógeno a fibrina catalizada por la trombina es la reacción final en la “cascada de coagulación.” La formación de fibrina provoca un incremento en la turbidez de la muestra, la cual se detecta por el fotómetro. La detección fotométrica se inicia manualmente presionando la tecla “Optic” con la adición simultánea del reactivo de prueba. El tiempo entre el inicio de la detección fotométrica y punto de inflexión de la curva de reacción (ver figura 2) es el resultado, este resultado aparece en segundos en la pantalla de cristal líquido (e impresa automáticamente en la impresora opcional).
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7
EXTINCTION 0.120 E
END-POINT OF REACTION
TURN-POINT OF REACTION
0
13.0s
START OF TEST (i.e. PT)
BEGIN OF FIBRINOGENTRANSFORMATION
Figura 2 – El Método de Turbidez. El diagrama representa una típica curva de PT con plasma control normal. En ~ 10 segundos el plasma líquido empieza a coagularse. El proceso termina en el “punto final”. El plasma es aglutinado por los monómeros de fibrina.
METODO INMUNOTURBIDIMETRICO PARA DIMERO D La luz intensa puede penetrar las soluciones turbias, tales como suspensiones de látex usadas para la determinación de la concentración de Dímero-D. Las partículas de látex diseñadas específicamente para pruebas de Dímero D ópticas se cubren con anticuerpos monoclonales específicos para el dímero D. Si el antígeno del dímero D esta presente en la muestra, ocurre una reacción antígeno-anticuerpo con un cambio simultáneo de transmisión de luz a 400 nm. La concentración de dímero D en la muestra es directamente proporcional al rango de la reacción antígeno-anticuerpo. El resultado se reporta como la media de la pendiente de la densidad óptica por minuto. (∆OD (E) / min, E = Extinción, una unidad de absorbancia de luz). El siguiente diagrama ilustra el principio de determinación del Coatron M1.
A g -A b
SAM PLE
OD
D D- MI ER AN T GI EN LEVEL
SAM PLE + LA TEX
Figura: Reacción cruzada Dímero-D COATRON M1 V1.07
8
La concentración del Dímero-D es proporcional al rango de cambio en densidad óptica. El Coatron M1 calcula la pendiente promedio de la reacción, utilizando únicamente la porción lineal de la curva. El algoritmo cinético para la prueba del Dímero-D se ilustra con tres curvas típicas de reacción. A dósis elevadas la relación lineal entre la señal y la concentración no es válida. Este es el llamado “Efecto Hook a dósis elevadas”.
H gi h D o se E fef c t ABSO R B T O I N O F LG I HT
1000 ngm/ L 3000 ngm/ L
250 ngm/ L
0 10 0 s m a xmi um mti e
mti e [s ]
Figura 4 – Relación entre la absorbancia y la concentración del Dímero-D. El algoritmo inmunoturbidimétrico: Subsecuente a la adición del látex, el instrumento analiza la muestra en un lapso de 80 a 120 segundos.
m easu rni g w ni dow
100m O D
op tci ca lbi ra toi n
S1 s gi na l
m ti e o f rm xi ni g
S2
S 0 = 0m O D S at r=t 0s
11s 20s
60s
100s
Figura 1 – Determinación del Dímero-D con el principio de absorbancia cinética. El resultado es expresado en mOD y se convierte a través de la curva de calibración en ng/mL Se toman dos puntos-señales. El primero a 60 segundos y el segundo a 100 segundos. La linearidad de la curva se calcula dividiendo S1 entre S2. Si la linearidad esta fuera de ciertos límites el resultado se reporta “>3500”. COATRON M1 V1.07
9
Los resultados que presenten estos valores se deben repetir con muestras diluidas 1:10 y la concentración obtenida se debe multiplicar por 10.
2. INSTALACION. No se requiere de precauciones especiales cuando se instale el COATRON M1, sin embargo, se recomienda lo siguiente:
Colóquelo en una superficie plana, libre de excesivos cambios de
Evitar vibraciones en la superficie durante la medición.
Proteger el instrumento de la luz del sol, humedad y polvo.
Asegurarse de que el voltaje y el dato de frecuencia en la placa de Identificación del instrumento concuerden con el rango de energía local antes de poner en marcha por primera vez el instrumento.
temperatura.
El instrumento se conecta a la fuente de energía por medio del cable principal. Si ocurre un daño notorio de éste, durante su envío, no lo utilice. Comuníquese con Laboratorios Licon S. A.
2.1. COMPONENTES DEL EQUIPO.
1 Pza
COATRON M1
1
Fuente de Poder
25 Pzas
Cubetas de Reacción individuales.
5 Pzas
Tubos de Reactivo.
2 Pzas
Adaptadores de Reactivo.
1 Pza
Manual de Operaciones.
Pza
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10
1 Pza
Tarjeta de Garantía.
Opciones Disponibles:
Impresora Térmica.
Cable de Impresora.
Pipeta Variable 10 - 100 uL, No electrónica.
Micropipetas 15, 25, 50 L
2.2 DESCRIPCION. Figura: Vista Frontal Pantalla: 2 x 16 Caracteres.
COATRON M1
Servicio: Un LED rojo indica fallas del sistema y el rango de temperatura no es correcto (36° a 39°C) Lectura: Un LED verde indica que el sistema esta listo para operar.
Service
Cursor: Cambios del parámetro activado.
Ready
Menú: Calibración de la prueba seleccionada.
Menu
Optic
Test
Enter
Enter: Confirmar los parámetros seleccionados Tiempo: Iniciar, detener, resetear el crónometro. Optic: Activar, empezar, detener las lecturas. Incubación: Llevar a 37°C las 6 posiciones de las cubetas. Reactivo: Llevar a 37°C las 2 posiciones del reactivo en tubos de Ø 11mm Canal Optico: Incubar a 37°C el canal de lectura.
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11
2.3 Datos Técnicos: Dimensión (Largo x ancho x altura):
245 x 130 x 60 cm
Peso:
0.51 Kg ( Sin fuente de poder)
Temperatura Ambiente:
18 - 23 °C
Fuente de Poder:
In Put= Out put= US
90-264 V~ 12 V, 1.0 A
voltaje de entrada: voltaje de salida:
110 Vac, 60 Hz 2 V, 1.2 A
Dispositivo:
Tarjeta del Microcontrolador. 14 Bit ADC; chip controlador de LCD, RS232, Tablero, cargador, temperatura, y Optico.
Interfase:
Serial 2400 Baud, 8 Bits, 1 paro, No paridad Usado en modo de impresión o debug.
Celda Optica.
Fotómetro con un LED emisor de 470 nm Emisor de modulación variable. Protector de amplificación variable. Rango lineal de densidad óptica 0.001 – 1.000 OD.
Teclado:
Tablero metálico con 8 teclas y 2 LED’s
Pantalla:
2 Líneas x 16 caracteres cristal líquido.
Bloque de Incubación:
1 Lectura, 6 de muestras, 2 pozos de reactivos Incubados a 37°C.
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2.4 Estándares de Seguridad Aprobados: Fabricado en cumplimiento con la Norma ISO 9001:2000 y ISO 13485:11//2000 Cumple con la declaración de conformidad CE para el Coatron M1.
3. Instrucciones de Operación: En esta sección encontrará las instrucciones generales necesarias para obtener el máximo provecho y beneficio del Coatron M1. Para aplicaciones de pruebas específicas consulte la sección 4 – 9.
INDICADOR DE TEMPERATURA:
La primera pantalla del operador es la información del software antes de cambiar a la pantalla de incubación.
SOFTWARE V1.10 Pantalla informativa. Revisión del Software (Rev. 1.10) PT:
000
LED en color rojo: toma aprox. 5 minutos para que el instrumento se equilibre a 37°C. PT
000
(prueba seleccionada
El COATRON M1 esta Listo para operar.
Cronometro)
Durante el periodo de atemperamiento las funciones no están disponibles. El menú de servicio oculto se puede activar en el sistema de status. (ver sección de “Servicio”). Por lo regular el operador no podrá entrar a este menú.
SELECCION DE PRUEBAS:
Siete diferentes pruebas se pueden realizar en el COATRON M1 ( TP, TTP, TT, FIB , Fal, FaE y DD). PT:
000
Seleccione la prueba con la tecla ”Test“.
PTB:
Cambie a Prueba activa con el cursor.
TEST
FIB:
000
Cambie a Prueba activa con el cursor.
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Para alternar entre pruebas, presionar la tecla “test” para activar la prueba seleccionada, con la teclas del cursor para cambiar y la tecla Enter para confirmar.
EL CRONOMETRO:
La función del cronómetro ayuda al operador a controlar correctamente los tiempos de incubación.
TP:
123 Cronómetro.
Para activar el cronómetro presionar la tecla “Timer” Para detener y resetear el cronómetro presionar la tecla “Timer” otra vez.
CALIBRACION:
Los parámetros específicos para las pruebas pueden ser ingresadas o almacenarse en el COATRON M1.
TP:
000 Entrar a calibración con la tecla “Menu”
TP:
ISI 1.12 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confimar con “Enter”
PT:
PT (100%)
12.0 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confirmar con “Enter” (valor 100% = Valor normal) PT:
PT ( 25 %) 0.0 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confirmar con “Enter” (valor 25 %) (0,0 s = no calcula el % de actividad)
PT:
000 La prueba esta calibrada.
Nota: La programación de los valores se podrá hacer presionando la tecla up/down en pasos de 10, con el cambio de dirección en pasos de 1. COATRON M1 V1.07
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Valores de establecidos para las Pruebas:
TP:
ISI = 1.10
Normal 100 % = 12.8 seg. 25%= 25.0 s
TTP:
NORMAL = 30.0
TT:
NORMAL = 15.0
FIB:
(1) 300 mg/dL. = (2) 150 mg/dL. = (3) 75 mg/dL =
FaE:
(1) 100 % = 12.0 seg. (2) 10 % = 35.0 seg. (3) 5 % = 40.0 seg.
Fal:
(1) 100 % = 32.5 seg. (2) 10 % = 60.0 seg. (3) 5 % = 70.0 seg.
DD:
(1) 1600 ng/mL = 150 mOD (2) 200 ng/mL = 30 mOD (3) 0 ng/mL = 0 mOD
seg. seg. 12.0 23.0 36.0
seg. seg. seg.
MEDICION:
Reconstituya el reactivo de acuerdo a la descripción del reactivo y atempere (si se requiere) en las posiciones de reactivo del instrumento. Inserte las cubetas en el área de incubación (6 posiciones) y pipeteé el volumen requerido de plasma dentro de las cubetas. Para iniciar una medición, coloque la cubeta específica en la posición de “Optic” . Active el optic con PTB: WAIT 000
„Optic“.
PTB:
WAIT
000
PTB:
ACTIVE
000
Esta pantalla aparecerá solo por unos pocos segundos y pasa Automáticamente a la siguiente pantalla.
La medición automáticamente iniciará con la adición del reactivo. En caso de algún problema: presione “Optic” para iniciar.
PTB:
000
La determinación esta corriendo. No toque o mueva la cubeta durante la medición!!!. El valor en la segunda línea muestra la densidad óptica in (OD).
000
Si se encuentra un coágulo, el resultado aparece en la pantalla y se imprime (si la impresora esta conectada) (% = 00, si el valor del 25% esta colocado como cero!!!)
0.023
PTB:
12.8 s
I = 1.04
% = 00
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Nota: Una vez que se inicia la medición se escucha un pequeño sonido (beep) seguido por un avance de flechas. La absorbancia actual se puede leer en la pantalla. Evite el o con la cubeta mientras se muestre este mensaje. Nuevamente se escuchará otro sonido (beep) cuando se haya detectado el coágulo y el resultado aparecerá en la pantalla. Si la impresora esta conectada, el resultado también se imprimirá. Si la reacción de formación del coágulo más que el tiempo máximo de lectura (300 seg), el optic se detendrá y aparecerá: “+++.+”, lo cual significa “coágulo no detectado”. La medición puede ser cancelada presionando la tecla “Optic” nuevamente.
Autoinicio: La medición se iniciará automáticamente adicionando el reactivo, cuando el optic este
activo. Para algunas pruebas (ej. Fibrinógeno, Trombina) esta característica no funciona adecuadamente debido a que el cambio de señal es muy pequeño. En este caso pipetee fuerte y rápidamente o presione la tecla de “optic” al adicionar.
4.
DETERMINACION DE TP.
RESUMEN El tiempo de Protrombina, descrito originalmente por Quick, ha sido ampliamente utilizado por muchos años como una prueba de screening pre-operatoria para la evaluar algunos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con anticoagulantes orales. Todos los factores de la etapa II y III son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo el tiempo de Protrombina, pero es muy sensible a niveles o disminuidos o deficientes de los factores I, II, V, VII y X. El Dicumerol y drogas relacionadas reducen la actividad del llamado “ complejo de Protrombina” factores II, VII, IX y X. Debido a que el tiempo de Protrombina es sensible a las deficiencias de todos esos factores, excepto IX, se puede usar en el monitoreo de la Terapia con anticoagulantes orales. El TP también se pude usar en la determinación cuantitativa de los factores II, V, VII y X.
PRINCIPIO La primera fase del Tiempo de Protombina mide el tiempo de coagulación de un plasma problema después de la adición del Reactivo de Tromboplastina el cual contiene cloruro de calcio. El Reactivo proporciona una fuente de “tromboplastina tisular”, activando al Factor VII y es por lo tanto sensible a todos los factores de la etapa II y III. Las deficiencias de los factores de la fase I (VIII, IX, XI y XII) no son detectadas con esta prueba.
INDICE DE SENSIBILIDAD INTERNACIONAL (ISI) El Comité Intenacional de Estandarización en Hematología y el Comité Internacional en Trombosis y Hemostasis han convenido reportar los resultados del tiempo de Protrombina utilizando el Indice Internacional de Sensibilidad (ISI) de los reactivos de tromboplastina y una Razón Internacional Normalizada (INR). Los reactivos de tromboplastina se les asigna un valor ISI por medio de una calibración contra una preparación de referencia Internacional, (IRP, 67/40) el cual por definición tiene un ISI= 1.0. Por lo tanto el valor de ISI asignado a los Reactivos de Tromboplastina describe una pendiente comparativa o sensibilidad relativa, con respecto a la tromboplastina de referencia. Entre mas bajo es el valor de ISI, es mayor la “sensibilidad. Conociendo el ISI de un reactivo de Tromboplastina en particular se puede calcular la razón, la cual podría haber sido encontrada si el IRP 67/400 se ha usado como el reactivo. Esta es la llamada Razón Internacional Normalizada (INR) y es determinada por: (Paciente PT (s) INR = R ISI = RAZON ISI = ( _______________ Normal PT (s)
)
ISI
Cada reactivo de PT comercial tiene asignado un valor de ISI en relación con la Tromboplastina de la WHO Estandarizada.
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PREPARACION A. Anticoagulante.
Se recomienda usar citrato de sodio, 3.8% o 3.2%.
B. Recolección de Plasma. 1. 2. 3. 4. 5.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico a 2-8°C. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
C. Reconstitución de Reactivos. Reconstituir con agua destilada con el volumen indicado en la etiqueta del frasco. Dejar a temperatura ambiente agitando en círculos ocasionalmente hasta que la solución se homogenice completamente. Estable por 7 días después de la reconstitución si se almacena de 2 - 8° C, evitar calentamiento prolongado. D. Preparación del COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5.
Encender el instrumento y esperar hasta que el LED esté encendido. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar PT como prueba activa. Checar la calibración Permitir que el reactivo se caliente por lo menos 5 minutos.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 25µL de plasma dentro de la cubeta. Precalentar el plasma por un minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50µL de tromboplastina precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “optic” otra vez) Si el instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no hay coagulación, en la pantalla aparecerá “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y INR.
PRUEBAS DE CALIBRACION Para la calibración INR de PT dos parámetros son requeridos. El valor normal (determine el valor normal de PT con el Plasma Normal.- rango esperado 11 – 14 s) COATRON M1 V1.07
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El valor ISI (leer el valor ISI en la etiqueta del Reactivo). Introducir ambos valores en el COATRON M1.
CONTROL DE CALIDAD Se deben de usar plasmas controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RESULTADOS ESPERADOS DE LOS CONTROLES Control Normal Control A1 Control A2
0.8 – 1.3 INR 2.0 - 3.5 INR 5.0 – 8.0 INR
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
5.
DETERMINACION APTT.
RESUMEN Desde sus orígenes a través del trabajo de Langdell y sus colaboradores, y más tarde modificado por otros, el tiempo de prueba de Tromboplastina Parcial Activada ha sido muy usado por un muchos años como un ensayo de screening pre-quirúrgico para la evaluación de ciertos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con Heparina. Todos los factores del Vía Intrínseca son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo la prueba de APTT. Este es usado principalmente, sin embargo, para detectar deficiencias de Factores en la fase I, llamados Factores VIII, IX, XI y XII, así como el Factor Fletcher. La prueba APTT es también usada en el monitoreo de la Terapia con Heparina, mostrando resultados de pruebas prolongados aproximadamente 0.1 unidades y más. La prueba es también usada en la determinación cuantitativa (Pruebas de Factor) de Factores VIII, IX, XI y XII y Factor Fletcher. PRINCIPIO La Prueba APTT mide el tiempo de coagulación de plasmas de prueba después de la adición del Reactivo APTT, permitiendo después un “tiempo de activación”, seguido por la adición de cloruro de calcio. Las deficiencias de aproximadamente 40% y menor de Factores VIII, IX, XI y XII resultarán en una APTT prolongada. La presencia de Heparina en cantidades adecuadas de AT-III también resultará en una APTT prolongada. REACTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de Calcio
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PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras. 1. 2. 3. 4. 5.
C.
Usar un amortiguador de citrato de sodio, 3.8% o 3.2%. (Ver, por ejemplo, la Ref. 7).
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
Reconstitución del Reactivo. Llevar a Temperatura ambiente antes de usar. Mezclar bien con movimientos circulares o inversión y mantener una barra de agitación en el contenedor del reactivo durante su uso para evitar que el activador particulado se sedimente. Evite calentamientos prolongados.
D.
Preparación del COATRON M1. 1. 2. 3. 4.
Encender el Instrumento y esperar hasta que el LED esté prendido. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar PTT como prueba activa. Precalentar el CaCl2 al menos 5 minutos.
PRUEBA DE CALIBRACION Los resultados de APTT deberán normalizarse contra un valor normal, el cual es obtenido de un APTT de un Plasma Humano Normal.- ver el rango esperado en el instructivo de uso. Introducir el valor normal en el COATRON M1. El PTT es mostrado en segundos y en radio.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1 2 3 4 5 6 7 8.
Pipetear 25µL. de plasma dentro de la cubeta. Adicionar 25µL. de APTT al plasma. Incubar exactamente por 5 minutos. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar optico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 25 µL. de Cloruro de Calcio precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “optic” otra vez) El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta el coágulo, la pantalla mostrará “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y radio o razón.
CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control. COATRON M1 V1.07
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RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
6.
DETERMINACIÓN DE FIBRINOGENO.
La Enzima, Trombina, es la penúltima proteína en la secuencia de coagulación, actuando sobre el fibrinógeno soluble, y convirtiéndolo a fibrina insoluble. Los niveles de Fibrinógeno en plasma Normal tiene un rango de 200-400 mg/dL aunque niveles tan bajos como 10 - 20 mg/dLl pueden ocurrir en una hipofibrinogenemia congénita o adquirida. La determinación de niveles de fibrinógeno en plasma ha sido útil en el diagnóstico de enfermedades hemorrágicas relacionadas con el contenido de Fibrinónogeno en plasma, estas incluyen hiperfibrinogenemia, hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia y una fibrinogenemia.
PRINCIPIO El reactivo de FIBRINOGENO comercial utiliza el tiempo de coagulación de Clauss para la determinación de niveles de fibrinógeno en plasma, donde un exceso de trombina bovina se utiliza para coagular el plasma diluido. Primero se hace una curva estándar usando un plasma de referencia con un contenido de fibrinógeno conocido. Cuando la trombina es adicionada, el tiempo de coagulación obtenido es inversamente proporcional al contenido de fibrinógeno. Después el plasma del paciente diluido 1/10 se coagula con la trombina y el tiempo de coagulación resultante se interpola en la curva estándar. REACTIVO Reactivo de Fibrinógeno Buffer de Dilución (IBS) o Buffer de Owrens PREPARACION A. B. 1. 2. 3. 4. 5. C.
Anticoagulante.
Usar citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
Recolección de Muestras. Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando ocasionalmente con movimientos circulares hasta disolución completa. Estable por 5 días después de su reconstitución a 2-8 °C. Evitar el calentamiento prolongado.
D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución) COATRON M1 V1.07
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E. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que esté listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FIB como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PRUEBA DE CALIBRACIÓN Para la calibración del Fibrinógeno se requieren 2 (máximo 3) parámetros. El Tiempo de coagulación del Control Normal diluido 1:10, 1:20 y 1:40. Leer la concentración del fibrinógeno en la etiqueta del reactivo Una Calibración típica puede ser:
300 mg/dL = 9.2 seg 150 mg/dL = 25.0 seg 75 mg/dL = 38.0 seg
Introduzca todos los valores en el COATRON M1
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 50µL. de plasma diluido (1:10 con IBS) dentro de la cubeta. Precalentar el plasma 1 min. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar optic (presionar OPTIC) Adicionar 25µL. de trombina y simultáneamente presionar optic. (presionar “Optic” nuevamente) El instrumento leerá un máximo de 60 sec. Los resultados aparecerán en segundos y en mg/dL
CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
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7.
DETERMINACIÓN DE TIEMPO DE TROMBINA.
RESUMEN: La enzima trombina es la penúltima proteína en la secuencia de la coagulación, activando sobre el fibrinógeno soluble y convirtiéndolo en fibrina insoluble. Como reactivo, la Trombina ha demostrado ser útil en la evaluación de laboratorio de muchas enfermedades del fibrinógeno, incluyendo hipofibrinogenemia y disfibrinogenemia. Un tiempo prolongado de Trombina resultará en niveles de Fibrinógeno de cerca de 100 mg/dL y menores. Las móleculas de Fibrinógeno no funcional (disfibrinogenemia) ocasionarán un Tiempo de Trombina prolongado. La Heparina en presencia de cantidades adecuadas de AT-III, también originarán tiempos de trombina prolongados. REACTIVO Trombina Bovina PREPARACION A.
Anticoagulante.
Usar un citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
B.
Recolección de Muestras. 1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
C.
Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado
D. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar TT como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. Pipetear 50µL de plasma dentro de la cubeta. 2. Precalentar el plasma por 1 minuto 3. Transferir la cubeta a la lectura de medición. 4. Activar optic (presionar OPTIC) 5. Adicionar 50µL de Trombina Bovina y simultáneamente nuevamente). 6. El instrumento leerá un máximo de 300 seg. 7. Los resultados aparecerán en segundos y en Ratio
presionar optic. (Presionar “Optic”
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ENSAYO DE CALIBRACION: Los resultados de TT se deben normalizar contra un valor normal, el cual se obtiene a partir de una TT de un Control Normal – rango esperado 13-17 seg. Introducir el valor normal al COATRON M1. El TT aparece en segundos y en radio. CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control. RESULTADOS ESPERADOS DEL CONTROL Control Normal
0.8 – 1.2 Radio
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
8. DETERMINACIÓN DE FACTORES EXTRÍNSECOS. (FACTORES II, V, VII Y X) RESUMEN
Las fallas de coagulación en la vía extrínseca se indica por los tiempos prolongados de PT. La actividad de un factor de la vía extrínseca ( Factores II, V, VII, X ) son determinados con UN PT del plasma de prueba mezclados con el plasma deficiente de factor. REACTIVOS Reactivo de Tromboplastina PLASMAS DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma
deficiente deficiente deficiente deficiente
F F F F
II V VII X
PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras.
1. 2. 3.
Usar un amortiguador de citrato de sodio, 38% o 32%.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. COATRON M1 V1.07
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4. 5. C.
Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacena en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo.
Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta del frasco. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)
E. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaEI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 25µL de plasma diluido 1:10 dentro de la cubeta. Adicionar 25µL del plasma deficiente en la cubeta. Incubar por 1 minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50 µL de Tromboplastina precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “Optic” otra vez) El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y % de actividad.
ENSAYO DE CALIBRACION Para el % de actividad – calibración de un factor se requieren 2 (máximo 3) puntos de calibración. Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación. -1:10 Plasma diluido ( 100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido ( 10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido ( 5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS Determine el tiempo de coagulación para ambas muestras e introduzca los valores al Coatron M1. CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RESULTADOS ESPERADOS DEL CONTROL Control anormal 40 – 60% de actividad del factor. COATRON M1 V1.07
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RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
9. DETERMINACIÓN DEL FACTORES INTRÍNSECOS (Factores VIII, IX, XI, XII) RESUMEN
Las fallas de coagulación en la vía intrínseca se indican por tiempos prolongados de PTT. La actividad de un factor de la vía Intrínseca ( Factores VIII, IX, XI, XII ) son determinados con una PTT del plasma de prueba mezclados con el plasma deficientes de factor. RECTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de calcio PLASMA DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma
deficiente deficiente deficiente deficiente
F F F F
VIII IX XI XII
PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras.
1 2 3 4 5 C.
Usar citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacena en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo.
Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)
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E. 1 2 3 4 5
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. Pipetear 25µL de plasma diluido 1:10 dentro de la cubeta. Adicionar 25µL del plasma deficiente en la cubeta. Pipetear 50 µL de Tromboplastina Parcial Activada dentro de la cubeta. Incubar exactamente por 5 minutos. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50 µL de Cloruro de Calcio precalentado y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “Optic” otra vez) 6. El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá “+++.+s”. 7. El resultado es mostrado en segundos y % de actividad. 1. 2. 3. 4. 5. 5.
Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación: -1:10 Plasma diluido (100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido (10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido (5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
10. DETERMINACION DE DIMERO D RESUMEN
El antígeno Dímero D siempre esta presente en el plasma como resultado del rompimiento de la plasmina de la fibrina. Después de un daño, o cuando se sufre de condiciones asociadas con un incremento en la actividad hemostásica se presenta un incremento e la concentración plasmática de Dimero-D. La determinación del Dímero-D ha llegado a ser una ayuda importante en el diagnóstico de la trombosis. Niveles elevados de DímeroD se encuentran en condiciones clínicas tales como trombosis venosa profunda (DVT), embolismo pulmonar (PE) y coagulación intravascular diseminada (DIC)2. Un resultado de Dímero-D negativo en un paciente con una sospecha de desorden trombolítico tiene un gran valor predictivo negativo. COATRON M1 V1.07
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PRINCIPIO El reactivo de micro-partículas consiste de partículas de tamaño micro de poliestireno acopladas con anticuerpos monoclonales específicos para el Dímero-D. Cuando el reactivo se expone a la muestra de plasma, el Dímero-D aglutinará las partículas ocasionando un incremento en la dispersión de la luz. Cuando se expone a una longitud de onda apropiada de luz monocromática, el incremento medido como turbidez o dispersión, es proporcional a la cantidad de Dímero D en la muestra.
RECOLECCION DE LA MUESTRA Obtener una muestra de sangre mediante venopunción. Mezclar 9 volúmenes de sangre venosa con un volumen de una solución de citrato trisódico.
PRECAUCION Unicamente para uso de diagnóstico In-vitro. Para utilizarse únicamente por personal entrenado. MATERIAL REQUERIDO PERO NO PROVISTO Estándar para calibración de Dímro-D – 3200 ng/mL Control para Dímero-D – aproximadamente 250 ng/mL Solución Salina para dilución del calibrador y muestras
CONTROL DE CALIDAD Para mantener resultados consistentes, se recomienda que se prueben plasmas controles en intervalos de tiempo regulares. PROCEDIMIENTO PARA COATRON M1 1. Pipetear 25µL de plasma dentro de la cubeta. 2. Pipetee 100 µL de buffer de reacción en la cubeta. 3. Incube por 1-10 minutos. 4. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). 5. Adicionar 50 µL de Látex precalentado y mezcle bien durante los primeros 5 segundos. El mezclado se puede realizar con ayuda de la pipeta. 6. El instrumento leerá en los siguientes 150 segundos para determinar el cambio de señal. 7. El resultado es mostrado en extinción y concentración en ng/mL.
RESULTADOS Los resultados se reportan en concentración de Díimero-D (ng/mL). Como no existe un estándar internacional disponible para el Dímero-D, cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales y valores de corte.
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11. Servicio. PRECAUCION Favor de leer esta sección completamente antes de operar el COATRON M1. Con el objeto de asegurar precisión y un uso adecuado del instrumento. Sólo personal autorizado, deberá llevar a cabo cualquier función de servicio en el Coatron M1.
11.1.
Funciones de Servicio.
Para entrar al submenú oculto de servicio, presionar la tecla “Timer” y la “Entrar” simultáneamente.
ESPERAR PARA 37°C
Tecla “Tiempo” + “Enter”
PT:
CARGA PRESTABLECIDA? NO
000
El siguiente servicio podrá ser llevado a cabo en el Coatron M1.
Resetear los valores preestablecidos Ajustar temperatura Corrección – OD Corrección – Coag. Ajuste Optico. Fijar RS232.
Usar las teclas de los cursores para cambiar y la tecla “Entrar” para confirmar!
Los malos ajustes pueden influir decisivamente en la medición! cambio, ser consciente de las consecuencias !
Antes de cualquier
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Valores Preestablecidos: El Coatron M1 puede almacenar pruebas y parámetros de sistema permanente en el tablero. Calibración PT: Calibración PTT: Calibración PT: Calibración FIB:
ISI = 1.10 100 % (normal) – 12.8 seg. Normal = 30.0 s Normal = 15.0 s (1) 300 mg/dL = 9.2 seg (2) 150 mg/dL = 23.0 seg (3) 75 mg/dL = 36.0 seg
Calibración FaE:
(1) 100 % = 12.0 seg (2) 10 % = 35.0 seg (3) 5 % = 40.0 seg (1) 100 % = 32.0 seg (4) 10 % = 60.0 seg (5) 5 % = 70.0 seg (1) 1600 ng/mL = 150 mOD (2) 200 ng/mL = 30 mOD (3) 0 ng/mL = mOD
Calibración Fal: Calibración DD:
Corrección de Temperatura OD Corrección PT: OD Correción PTT: OD Corrección TT: OD Corrección FIB: OD Corrección PT: OD Corrección FaE: OD Corrección FaI: OD Corrección DD: Corrección de coag PT: Corrección de coag PTT: Corrección de coag TT: Corrección de coag FIB: Corrección de coag PT: Corrección de coag Fa-E: Corrección de coag Fa-I: Corrección de coag DD: Chequeo Optico: RS 232: Impresión de Resultados
25% = 25.0 seg.
°C = 369 (9119) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 (Dato->RS232 = NO)
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Ajuste de Temperatura: El incubador del Coatron M1 tiene una temperatura de 37°C. Cuando el LED VERDE está encendido, llene el tubo del reactivo con agua y colóquelo en la posición del reactivo. Colocar un termómetro en el tubo de reactivo y permita que se atempere por 10 minutos. Dejar calentar por 10 minutos y leer la temperatura.
Set temperature °C = 371 (9085)
Ejemplo: La temperatura actual de 37.1°C y el valor digital asignado es de 9085. Compare la temperatura que aparece en la pantalla y la del termómetro. Si la temperatura es diferente, ajústela presionando Up/Down. Espere hasta que la temperatura se estabilice a 37°C y aparezca en la pantalla del Coatron M1. Cheque y corrija el sistema de temperatura si no es equivalente a la del termómetro externo. Utilice las teclas UP / DOWN para incrementar o disminuir la temperatura
Termómetro
Tubo de reactivo, con aproximadamente 1 mL de agua
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Ajuste Optico: A.) Corrección OD.
OD – CORRECTION PT = 100 La medida de densidad óptica del instrumento se puede corregir mediante un factor para cada prueba. (OD-Correction = 100 densidad óptica * 1.00 -> no afecta) (OD-Correction = 120 densidad óptica * 1.20) OD-CORRECCION inferior a 100 causará: Mayores tiempos de coagulación. Reduce sensibilidad del método (más resultados como +++.+s) OD-CORRECCION superior a 100 causará: Menores tiempos de coagulación. Incremento de la sensibilidad del método, la cual puede causar resultados erróneos (resultados en menor tiempo ! ! ! !)
PRECAUCION: LA CORRECCION DE OD debe estar dentro de 50 -150 Especial: CORRECCION OD para prueba de Fibrinógeno. Corra un calibrador de 300 mg/dL. El resultado se debe de acercar a 10 segundos. Si esta por arriba/debajo de 10 segundos, incremente/disminuya la Corrección OD ligeramente. B.) Corrección de Coagulación. Con la corrección de coagulación el instrumento puede corregir el resultado para una mejor correlación con otro sistema. Ejemplo: En otro instrumento un plasma da un PT = 12.1 segundos, en el Coatron M1 el resultado es de 11.0 segundos. Para obtener resultados iguales, el resultado tiene que ser corregido por un factor 1.10 (+10%). Esto se puede hacer introduciendo en CORRECCION DE COAG = 110 (Factor 1.10).
CORRECCION DE COAG PT= 100
Chequeo Optico Se recomienda el chequeo óptico, si aumentan los problemas con las determinaciones. Retire la cubeta del óptico. CHEQUEO OPTICO
mw = 11323 004 El Coatron M1 ajusta este valor óptico (mw) a 11323 como una amplificación (amp) del nivel 4. Rango Control: (asegúrese de que la cubeta no esta colocada en el óptico) mw: 10000 – 13000 amp: 3-6 COATRON M1 V1.07
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Presione “menú” para repetir el chequeo óptico o presione UP/DOWN para cambiar la amplificación.
Interfase RS 232 La interfase puede usarse de dos maneras:
Modo de impresión Los resultados serán impresos. Modo debug La curva de reacción podrá ser visualizada en una PC.
DATA → RS232 NO (NO Modo de impresión; SI Modo Debug) El puerto de interfase esta colocado a 2400 Baud, 8 Bits, 1 paro, No paridad. Ejemplo de impresión de resultados:
01
PT:
Corrimiento # 1
PT:
Corrimiento # 2
PT:
Corrimiento # 3
PT:
Corrimiento # 4
12.5 s I = 1.03 02 13.2 s I = 1.35 03
04
12.8 s I = 1.22 12.6 s I = 1.04
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El Modo Debug Requerimientos:
- Computadora IBM (DOS). - Windows 95/98. - Lector software RS232 - Cable de servicio serial.
Figura. Pantalla del Lector RS232, el cual muestra una curva típica de coagulación. Remarcando: La curva puede almacenarse si el switch (almacenar) esta en posición de encendido (ON) La curva no será almacenada si el switch (almacenar) esta en posición de apagado (OFF) “Meβwet” = densidad óptica actual in mOD.
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11.2.
Guía de localización de averías.
Nota:
Siempre verifique que el instrumento ejecute apropiadamente las pruebas de muestras de control.
Mensaje de error de sistema
Falla óptica !
La medición no automáticamente
La medición erróneamente
inicia
inicia
LED Rojo de Servicio esta encendido LED Verde Listo esta apagado Temperatura no correcta +++.+s “No detecta el Coágulo”
Tiempo de coagulación muy corto
Tiempo de coagulación muy largo
Interpretación y acción correctiva
El Coatron M1 no está operando en su especificación óptica. Esto puede pasar, si: No hay suficiente luz (por ejemplo con reactivos muy turbios o muestras lipémicas). Cambiar el reactivo. Evitar muestras extremas. Hay luz intensa (por ejemplo luz directa del sol). Proteger contra la luz del sol. El láser LED está quemado. Remplazar el dispositivo. El cambio de señal es muy pequeño. Uso de reactivos muy claros (ej. Fibrinógeno, Trombina) Trate de pipetear fuerte y rápidamente o iniciar la medición presionando “Optic” al momento de adicionar. La señal sonora y temperatura pueden iniciar la determinación falsamente. Detenga la determinación y active el óptico brevemente antes de iniciar. El poder eléctrico no es suficiente. Usar el eliminador de poder original. Cargar la batería, si se usa. La temperatura está fuera de rango. Esperar unos minutos. Si el error persiste ar al servicio técnico. Ajustar la temperatura. Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes: El tiempo de coagulación es mayor que 300 segundos. El tiempo de coagulación es menor que 8 segundos. Reactivo Incorrecto El nivel de Fibrinógeno de la muestra es menor de 100 mg/dL (por ejemplo muestras diluidas). Burbujas de aire. Residuos en cubeta. Muestras recolectadas inadecuadamente OD-Correction esta puesto en cero. Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes Reactivo incorrecto. Burbujas de aire. Residuos en cubeta. Muestras recolectadas inadecuadamente Mal ajuste del óptico. Acción: Usar materiales recomendados. Ligera disminución del OD-Corrección Incremento del Rango – OD Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes Reactivos incorrectos. Burbujas de aire. Bajo nivel de Fibrinogeno. Muestras recolectadas inadecuadamente Mal ajuste óptico. Acción: Usar materiales recomendados. Ligera disminución del OD-Corrección Disminución del Rango – OD COATRON M1 V1.07
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12. Partes que componen el aparato. Parte
Contenido No. correspondiente al dibujo
Cubierta
1
1, 2, 3
Fuente de poder 90-264 Vac EU
1
No aparece en el dibujo
Fuente de poder 90-264 Vac USA
1
No aparece en el dibujo
Tablero
1
4
Pantalla
1
12
Sistema a bordo
1
11
Transmisor
1
10
Receptor
1
9
Placa de Montaje
1
5
Distancia M3x16
1
29
Distancia D6xH3
1
18
Bloque Optico
1
8
Placa metálica de calor
1
13
Sensor de Temperatura
1
17
Cable RS232
1
14
Cable de salida DC
1
15
Bloque de calor
1
6
Manual de Operación
1
No aparece en el dibujo
Garantía
1
No aparece en el dibujo
COATRON M1 V1.07
35
13. Imagen Técnica (3era. Dimensión)
COATRON M1 V1.07
36
MANUAL DE OPERACION
COATRON M1 V1.07
1
INDICE
PRECAUCION
3
1. INTRODUCCION
5
2. INSTALACION 2.1 2.2 2.3 2.4
10
COMPONENTES DEL EQUIPO DESCRIPCION DATOS TECNICOS APROBACION DE LOS ESTANDARES DE SEGURIDAD
10 11 12 13
3. INSTRUCCIONES DE OPERACION
13
4. DETERMINACION DE PT
16
5. DETERMINACION DE APTT
18
6. DETERMINACION DE FIB
20
7. DETERMINACION DE TT
22
8. DETERMINACION DE FACTORES EXTRINSECOS
23
9. DETERMINACION DE FACTORES INTRINSECOS
25
10. DETERMINACION DE DIMERO-D
26
11. SERVICIO
28
FUNCIONES DE SERVICIO GUIA DE LOCALIZACION AVERIAS
28 34
12. PARTES QUE COMPONEN EL APARATO
35
13. IMAGEN TECNICA (3era. DIMENSION)
36
COATRON M1 V1.07
2
ADVERTENCIA:
Lea cuidadosamente el Manual de operación antes de utilizar el Coatron M1. Para asegurar una adecuada ejecución deberá seguir todas las advertencias y referencias para la seguridad técnica descritas en este manual. Las reparaciones del instrumento deberán realizarse por personal calificado, y deberán remplazarse las partes de acuerdo con las especificaciones del instrumento. El COATRON M1 esta diseñado para usarse con plasma humano. Así como con todos los productos derivados de sangre humana, no se conoce ninguna prueba que garantice completamente que estos productos no podrán trasmitir Hepatitis, SIDA u otras enfermedades infecciosas, por lo que el operador del instrumento deberá de tomar las precauciones apropiadas. En caso de que se derrame en el instrumento, limpie con una toalla de papel empapada con hipoclorito al 10%. El coatron M1 es fabricado por TECO GmbH. TECO GMBH Dieselstrasse D-84088 Neufahrn N.B.
MEDICAL INSTRUMENTS, PRODUCTION + TRADING GMBH Distribuidor autorizado: En México.
Laboratorios Licon S.A. Viveros del Rocio # 33 Col. Viveros de la Loma, Tlalnepantla, Edo. De Méx. C.P. 54080 México. Teléfono: 53 – 62 – 02 – 99. Fax: 53 –62 –17-92
COATRON M1 V1.07
3
Historia del Software: 1.04
Primera Liberación
1.05
Mejoramiento del control de temperatura y carga de batería
1.06
51 1s en lugar de 255 s para el cronómetro Se puede usar el % de actividad para la determinación de PT
1.07
Se desactiva el cargador de batería Se introduce corrección de OD para cada prueba Control de temperatura estabilizado
1.08
Tiempo muerto para PT/TT/FaE = 5 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para PTT/Fal = 10 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para FIB = 4.5 seg (anterior 5 seg)
1.09
Mejoramiento de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas
1.10
Nueva implementación de un sistema de control de medición completo. El interruptor de tiempo básico ahora se controla por un reloj de cristal en lugar de un reloj controlador para aislar el sistema de medición de la temperatura. Se adicionó un Sistema de chequeo en el menú. Presionando la tecla “menú” el óptico comenzará a calibrar. El valor debe estar entre 10000-14000 (se requiere un canal vacío). Presionando “UP/DOWN” la amplificación se puede cambiar manualmente. Inicio automático del óptico. Después de que el óptico esta “activo”, la determinación comenzará automáticamente cuando la señal óptica cambie (ej. al adicionar reactivo). Con reactivos muy claros (f.e. Fibrinógeno) el “Autostart” requiere una técnica de pipeteo muy rápida. Se introdujo para cada prueba una COAC-corrección. Se adapto la nueva prueba de Dímero-D.
1.11
Se mejoro la programación de los datos de calibración. Se igualaron al Coatron M2 los algoritmos para todas las pruebas. Cambio de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas.
COATRON M1 V1.07
4
1. INTRODUCCION La Hemostasis es un proceso Bioquímico para proteger al organismo de la perdida de sangre después de un daño Vascular. La Hemostasis sucede en tres fases: . La Vasoconstricción y agregación plaquetaria: disparar la cascada de coagulación.
detienen
inmediatamente
( en
segundos) y
. La cascada de coagulación: Es una reacción en cadena en la cual enzimas inactivas se convierten a su forma activa. La cascada finaliza en la conversión del fibrinógeno a fibrina por Trombina activada. En la presencia del factor XIII activado la fibrina se estabiliza y se forma un trombo insoluble ( coagulo de fibrina), el sangrado finalmente se detiene. . Para prevenir al organismo de eventos trombolíticos, la coagulación debe ser controlada muy bien. Esto se realiza por el sistema fibrinolítico. Los Inhibidores son capaces de invertir la activación de los factores y regula por lo tanto, la coagulación. Los inhibidores básicos son la Antitrombina y la Proteína C. El sistema fibrinolítico es también el responsable de romper el coagulo de fibrina. Después de la lisis del coágulo, el daño vascular esta completamente reparado. Todos los factores e inhibidores están muy cuidadosamente equilibrados. En caso de un desajuste o una disfunción, puede o podría aparecer una enfermedad vascular grave. La disfunción de la hemostasis es una de las enfermedades más comunes, la cual termina muy frecuentemente en muerte (~ por 1000). Algunos ejemplos son la trombosis venosa profunda (DVT) o embolismo pulmonar (PE). El COATRON M1 es un coagulómetro de un canal foto-óptico para determinar los parámetros básicos de la segunda etapa de la hemostasis (cascada de coagulación) en plasma humano citratado. Esta diseñado para las pruebas de coagulación in-vitro del Laboratorio Clínico. Los ensayos de Coagulación con formación de fibrina tales como los ensayos de punto final se pueden correr en el instrumento, así como ensayos inmunoturbidimétricos, como el Dímero D. LAS SIGUIENTES PRUEBAS Y SUS CARACTERISTICAS QUE ESTAN DISPONIBLES EN EL INSTRUMENTO SE ENLISTAN A CONTINUACIÓN: - PT (tiempo de Protombina) El TP se expresa en segundos (en fracciones de 100 ms para las muestras) y se normalizan automáticamente en INR (Razón de Normalización Internacional). El valor normal de TP (100%) y el ISI (Indice de Sensibilidad Internacional) se pueden almacenar a bordo. Adicionalmente el resultado se puede convertir en % de Actividad cuando los valores al 100 y 25% se almacenan en la memoria del instrumento. - APTT (Tiempo de Protrombina Parcial Activada) La APTT se reporta en segundos y se normaliza automáticamente en radio: Se puede guardar en la memoria el valor normal del APTT - TT (Tiempo de Trombina) El TT es reportado en segundos y normalizado automáticamente en radio. El valor normal de TT se puede almacenar en la memoria.
COATRON M1 V1.07
5
- FIB (Fibrinógeno). El FIB se reporta en segundos y se convierte automáticamente a una concentración plasmática en mg/dL. Es necesario construir una curva de calibración para obtener los resultados en mg/dL. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. - FaE (Factores de vía Extrínseca, FII, FV, FVII, FX) - FaI ( Factores de vía Intrínseca, FVIII, FIX, FXI, FXII) Los factores de la coagulación son reportados en segundos y convertidos automáticamente en % de actividad en plasma. Se requiere una calibración para obtener los resultados en %. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. -
Dímero D
El valor de Dímero D cuantitativo se puede almacenar utilizando el equipo de TECO Blue Dímero D. rango: de 100 a 3200 ng/mL (lineal). Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. Se recomienda correr una curva de calibración con un estándar de 1600 y 200 ng/mL. General: Todas las pruebas se llevan a cabo con una cuarta parte de los volúmenes regulares de reactivo y de muestra. La microcubeta debe usarse con un mínimo de 75 µL → por ejemplo 25 µL de muestra + 50 µL de reactivo de Tromboplastina para TP.
El COATRON M1 soporta una Interfase unidireccional RS232 (valores fijos a 2400, 8, 1, No). Si la interfase está en modo de impresión, se imprimirán automáticamente todos los resultados. El RS 232 también puede colocarse para modo debug. Por lo que se pueden enviar los datos ópticos a una terminal de PC, donde se visualiza la reacción de coagulación.
El COATRON M1 cuenta con un área de incubación para 6 muestras y 2 posiciones para el reactivo. Al encender tardara de 3-5 minutos para alcanzar la temperatura de 37°C, lo cual se indicará con una luz verde.
COATRON M1 V1.07
6
TEORIA DEL FUNCIONAMIENTO. El COATRON M1 es un fotómetro de 1 canal altamente sensible. Un intenso láser óptico a 470 nm asegura resultados exactos y precisos, aún con el empleo de muestras ictéricas o lipémicas. La señal receptora es detectada y convertida a una corriente eléctrica. Durante la prueba el sistema busca la mejor señal de amplificación, por lo tanto pueden emplearse una gran variedad de reactivos ( por ejemplo tromboplastinas muy turbias o reactivos muy claros). Adicionalmente el software está basado en la densidad óptica (extinción) , la cual absorbe los efectos de la luz externa. CUVETTE
PLASMA + REAGENT LASER DETECTOR
DS I PLAY
M c i ro C - on tro le l r
PR N I TER
Figura 1 - El Principio de Detección. El Plasma y el reactivo absorben la luz láser transmitida. La medida de absorbancia se obtiene por el detector y lo envían al microcontrolador. Aquí el programa analiza la señal y envía el resultado a la pantalla y a la impresora (opcional).
METODO DE TURBIDEZ (METODO DE COAGULACION) La conversión de fibrinógeno a fibrina catalizada por la trombina es la reacción final en la “cascada de coagulación.” La formación de fibrina provoca un incremento en la turbidez de la muestra, la cual se detecta por el fotómetro. La detección fotométrica se inicia manualmente presionando la tecla “Optic” con la adición simultánea del reactivo de prueba. El tiempo entre el inicio de la detección fotométrica y punto de inflexión de la curva de reacción (ver figura 2) es el resultado, este resultado aparece en segundos en la pantalla de cristal líquido (e impresa automáticamente en la impresora opcional).
COATRON M1 V1.07
7
EXTINCTION 0.120 E
END-POINT OF REACTION
TURN-POINT OF REACTION
0
13.0s
START OF TEST (i.e. PT)
BEGIN OF FIBRINOGENTRANSFORMATION
Figura 2 – El Método de Turbidez. El diagrama representa una típica curva de PT con plasma control normal. En ~ 10 segundos el plasma líquido empieza a coagularse. El proceso termina en el “punto final”. El plasma es aglutinado por los monómeros de fibrina.
METODO INMUNOTURBIDIMETRICO PARA DIMERO D La luz intensa puede penetrar las soluciones turbias, tales como suspensiones de látex usadas para la determinación de la concentración de Dímero-D. Las partículas de látex diseñadas específicamente para pruebas de Dímero D ópticas se cubren con anticuerpos monoclonales específicos para el dímero D. Si el antígeno del dímero D esta presente en la muestra, ocurre una reacción antígeno-anticuerpo con un cambio simultáneo de transmisión de luz a 400 nm. La concentración de dímero D en la muestra es directamente proporcional al rango de la reacción antígeno-anticuerpo. El resultado se reporta como la media de la pendiente de la densidad óptica por minuto. (∆OD (E) / min, E = Extinción, una unidad de absorbancia de luz). El siguiente diagrama ilustra el principio de determinación del Coatron M1.
A g -A b
SAM PLE
OD
D D- MI ER AN T GI EN LEVEL
SAM PLE + LA TEX
Figura: Reacción cruzada Dímero-D COATRON M1 V1.07
8
La concentración del Dímero-D es proporcional al rango de cambio en densidad óptica. El Coatron M1 calcula la pendiente promedio de la reacción, utilizando únicamente la porción lineal de la curva. El algoritmo cinético para la prueba del Dímero-D se ilustra con tres curvas típicas de reacción. A dósis elevadas la relación lineal entre la señal y la concentración no es válida. Este es el llamado “Efecto Hook a dósis elevadas”.
H gi h D o se E fef c t ABSO R B T O I N O F LG I HT
1000 ngm/ L 3000 ngm/ L
250 ngm/ L
0 10 0 s m a xmi um mti e
mti e [s ]
Figura 4 – Relación entre la absorbancia y la concentración del Dímero-D. El algoritmo inmunoturbidimétrico: Subsecuente a la adición del látex, el instrumento analiza la muestra en un lapso de 80 a 120 segundos.
m easu rni g w ni dow
100m O D
op tci ca lbi ra toi n
S1 s gi na l
m ti e o f rm xi ni g
S2
S 0 = 0m O D S at r=t 0s
11s 20s
60s
100s
Figura 1 – Determinación del Dímero-D con el principio de absorbancia cinética. El resultado es expresado en mOD y se convierte a través de la curva de calibración en ng/mL Se toman dos puntos-señales. El primero a 60 segundos y el segundo a 100 segundos. La linearidad de la curva se calcula dividiendo S1 entre S2. Si la linearidad esta fuera de ciertos límites el resultado se reporta “>3500”. COATRON M1 V1.07
9
Los resultados que presenten estos valores se deben repetir con muestras diluidas 1:10 y la concentración obtenida se debe multiplicar por 10.
2. INSTALACION. No se requiere de precauciones especiales cuando se instale el COATRON M1, sin embargo, se recomienda lo siguiente:
Colóquelo en una superficie plana, libre de excesivos cambios de
Evitar vibraciones en la superficie durante la medición.
Proteger el instrumento de la luz del sol, humedad y polvo.
Asegurarse de que el voltaje y el dato de frecuencia en la placa de Identificación del instrumento concuerden con el rango de energía local antes de poner en marcha por primera vez el instrumento.
temperatura.
El instrumento se conecta a la fuente de energía por medio del cable principal. Si ocurre un daño notorio de éste, durante su envío, no lo utilice. Comuníquese con Laboratorios Licon S. A.
2.1. COMPONENTES DEL EQUIPO.
1 Pza
COATRON M1
1
Fuente de Poder
25 Pzas
Cubetas de Reacción individuales.
5 Pzas
Tubos de Reactivo.
2 Pzas
Adaptadores de Reactivo.
1 Pza
Manual de Operaciones.
Pza
COATRON M1 V1.07
10
1 Pza
Tarjeta de Garantía.
Opciones Disponibles:
Impresora Térmica.
Cable de Impresora.
Pipeta Variable 10 - 100 uL, No electrónica.
Micropipetas 15, 25, 50 L
2.2 DESCRIPCION. Figura: Vista Frontal Pantalla: 2 x 16 Caracteres.
COATRON M1
Servicio: Un LED rojo indica fallas del sistema y el rango de temperatura no es correcto (36° a 39°C) Lectura: Un LED verde indica que el sistema esta listo para operar.
Service
Cursor: Cambios del parámetro activado.
Ready
Menú: Calibración de la prueba seleccionada.
Menu
Optic
Test
Enter
Enter: Confirmar los parámetros seleccionados Tiempo: Iniciar, detener, resetear el crónometro. Optic: Activar, empezar, detener las lecturas. Incubación: Llevar a 37°C las 6 posiciones de las cubetas. Reactivo: Llevar a 37°C las 2 posiciones del reactivo en tubos de Ø 11mm Canal Optico: Incubar a 37°C el canal de lectura.
COATRON M1 V1.07
11
2.3 Datos Técnicos: Dimensión (Largo x ancho x altura):
245 x 130 x 60 cm
Peso:
0.51 Kg ( Sin fuente de poder)
Temperatura Ambiente:
18 - 23 °C
Fuente de Poder:
In Put= Out put= US
90-264 V~ 12 V, 1.0 A
voltaje de entrada: voltaje de salida:
110 Vac, 60 Hz 2 V, 1.2 A
Dispositivo:
Tarjeta del Microcontrolador. 14 Bit ADC; chip controlador de LCD, RS232, Tablero, cargador, temperatura, y Optico.
Interfase:
Serial 2400 Baud, 8 Bits, 1 paro, No paridad Usado en modo de impresión o debug.
Celda Optica.
Fotómetro con un LED emisor de 470 nm Emisor de modulación variable. Protector de amplificación variable. Rango lineal de densidad óptica 0.001 – 1.000 OD.
Teclado:
Tablero metálico con 8 teclas y 2 LED’s
Pantalla:
2 Líneas x 16 caracteres cristal líquido.
Bloque de Incubación:
1 Lectura, 6 de muestras, 2 pozos de reactivos Incubados a 37°C.
COATRON M1 V1.07
12
2.4 Estándares de Seguridad Aprobados: Fabricado en cumplimiento con la Norma ISO 9001:2000 y ISO 13485:11//2000 Cumple con la declaración de conformidad CE para el Coatron M1.
3. Instrucciones de Operación: En esta sección encontrará las instrucciones generales necesarias para obtener el máximo provecho y beneficio del Coatron M1. Para aplicaciones de pruebas específicas consulte la sección 4 – 9.
INDICADOR DE TEMPERATURA:
La primera pantalla del operador es la información del software antes de cambiar a la pantalla de incubación.
SOFTWARE V1.10 Pantalla informativa. Revisión del Software (Rev. 1.10) PT:
000
LED en color rojo: toma aprox. 5 minutos para que el instrumento se equilibre a 37°C. PT
000
(prueba seleccionada
El COATRON M1 esta Listo para operar.
Cronometro)
Durante el periodo de atemperamiento las funciones no están disponibles. El menú de servicio oculto se puede activar en el sistema de status. (ver sección de “Servicio”). Por lo regular el operador no podrá entrar a este menú.
SELECCION DE PRUEBAS:
Siete diferentes pruebas se pueden realizar en el COATRON M1 ( TP, TTP, TT, FIB , Fal, FaE y DD). PT:
000
Seleccione la prueba con la tecla ”Test“.
PTB:
Cambie a Prueba activa con el cursor.
TEST
FIB:
000
Cambie a Prueba activa con el cursor.
COATRON M1 V1.07
13
Para alternar entre pruebas, presionar la tecla “test” para activar la prueba seleccionada, con la teclas del cursor para cambiar y la tecla Enter para confirmar.
EL CRONOMETRO:
La función del cronómetro ayuda al operador a controlar correctamente los tiempos de incubación.
TP:
123 Cronómetro.
Para activar el cronómetro presionar la tecla “Timer” Para detener y resetear el cronómetro presionar la tecla “Timer” otra vez.
CALIBRACION:
Los parámetros específicos para las pruebas pueden ser ingresadas o almacenarse en el COATRON M1.
TP:
000 Entrar a calibración con la tecla “Menu”
TP:
ISI 1.12 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confimar con “Enter”
PT:
PT (100%)
12.0 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confirmar con “Enter” (valor 100% = Valor normal) PT:
PT ( 25 %) 0.0 Cambiar los parámetros con las teclas del cursor confirmar con “Enter” (valor 25 %) (0,0 s = no calcula el % de actividad)
PT:
000 La prueba esta calibrada.
Nota: La programación de los valores se podrá hacer presionando la tecla up/down en pasos de 10, con el cambio de dirección en pasos de 1. COATRON M1 V1.07
14
Valores de establecidos para las Pruebas:
TP:
ISI = 1.10
Normal 100 % = 12.8 seg. 25%= 25.0 s
TTP:
NORMAL = 30.0
TT:
NORMAL = 15.0
FIB:
(1) 300 mg/dL. = (2) 150 mg/dL. = (3) 75 mg/dL =
FaE:
(1) 100 % = 12.0 seg. (2) 10 % = 35.0 seg. (3) 5 % = 40.0 seg.
Fal:
(1) 100 % = 32.5 seg. (2) 10 % = 60.0 seg. (3) 5 % = 70.0 seg.
DD:
(1) 1600 ng/mL = 150 mOD (2) 200 ng/mL = 30 mOD (3) 0 ng/mL = 0 mOD
seg. seg. 12.0 23.0 36.0
seg. seg. seg.
MEDICION:
Reconstituya el reactivo de acuerdo a la descripción del reactivo y atempere (si se requiere) en las posiciones de reactivo del instrumento. Inserte las cubetas en el área de incubación (6 posiciones) y pipeteé el volumen requerido de plasma dentro de las cubetas. Para iniciar una medición, coloque la cubeta específica en la posición de “Optic” . Active el optic con PTB: WAIT 000
„Optic“.
PTB:
WAIT
000
PTB:
ACTIVE
000
Esta pantalla aparecerá solo por unos pocos segundos y pasa Automáticamente a la siguiente pantalla.
La medición automáticamente iniciará con la adición del reactivo. En caso de algún problema: presione “Optic” para iniciar.
PTB:
000
La determinación esta corriendo. No toque o mueva la cubeta durante la medición!!!. El valor en la segunda línea muestra la densidad óptica in (OD).
000
Si se encuentra un coágulo, el resultado aparece en la pantalla y se imprime (si la impresora esta conectada) (% = 00, si el valor del 25% esta colocado como cero!!!)
0.023
PTB:
12.8 s
I = 1.04
% = 00
COATRON M1 V1.07
15
Nota: Una vez que se inicia la medición se escucha un pequeño sonido (beep) seguido por un avance de flechas. La absorbancia actual se puede leer en la pantalla. Evite el o con la cubeta mientras se muestre este mensaje. Nuevamente se escuchará otro sonido (beep) cuando se haya detectado el coágulo y el resultado aparecerá en la pantalla. Si la impresora esta conectada, el resultado también se imprimirá. Si la reacción de formación del coágulo más que el tiempo máximo de lectura (300 seg), el optic se detendrá y aparecerá: “+++.+”, lo cual significa “coágulo no detectado”. La medición puede ser cancelada presionando la tecla “Optic” nuevamente.
Autoinicio: La medición se iniciará automáticamente adicionando el reactivo, cuando el optic este
activo. Para algunas pruebas (ej. Fibrinógeno, Trombina) esta característica no funciona adecuadamente debido a que el cambio de señal es muy pequeño. En este caso pipetee fuerte y rápidamente o presione la tecla de “optic” al adicionar.
4.
DETERMINACION DE TP.
RESUMEN El tiempo de Protrombina, descrito originalmente por Quick, ha sido ampliamente utilizado por muchos años como una prueba de screening pre-operatoria para la evaluar algunos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con anticoagulantes orales. Todos los factores de la etapa II y III son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo el tiempo de Protrombina, pero es muy sensible a niveles o disminuidos o deficientes de los factores I, II, V, VII y X. El Dicumerol y drogas relacionadas reducen la actividad del llamado “ complejo de Protrombina” factores II, VII, IX y X. Debido a que el tiempo de Protrombina es sensible a las deficiencias de todos esos factores, excepto IX, se puede usar en el monitoreo de la Terapia con anticoagulantes orales. El TP también se pude usar en la determinación cuantitativa de los factores II, V, VII y X.
PRINCIPIO La primera fase del Tiempo de Protombina mide el tiempo de coagulación de un plasma problema después de la adición del Reactivo de Tromboplastina el cual contiene cloruro de calcio. El Reactivo proporciona una fuente de “tromboplastina tisular”, activando al Factor VII y es por lo tanto sensible a todos los factores de la etapa II y III. Las deficiencias de los factores de la fase I (VIII, IX, XI y XII) no son detectadas con esta prueba.
INDICE DE SENSIBILIDAD INTERNACIONAL (ISI) El Comité Intenacional de Estandarización en Hematología y el Comité Internacional en Trombosis y Hemostasis han convenido reportar los resultados del tiempo de Protrombina utilizando el Indice Internacional de Sensibilidad (ISI) de los reactivos de tromboplastina y una Razón Internacional Normalizada (INR). Los reactivos de tromboplastina se les asigna un valor ISI por medio de una calibración contra una preparación de referencia Internacional, (IRP, 67/40) el cual por definición tiene un ISI= 1.0. Por lo tanto el valor de ISI asignado a los Reactivos de Tromboplastina describe una pendiente comparativa o sensibilidad relativa, con respecto a la tromboplastina de referencia. Entre mas bajo es el valor de ISI, es mayor la “sensibilidad. Conociendo el ISI de un reactivo de Tromboplastina en particular se puede calcular la razón, la cual podría haber sido encontrada si el IRP 67/400 se ha usado como el reactivo. Esta es la llamada Razón Internacional Normalizada (INR) y es determinada por: (Paciente PT (s) INR = R ISI = RAZON ISI = ( _______________ Normal PT (s)
)
ISI
Cada reactivo de PT comercial tiene asignado un valor de ISI en relación con la Tromboplastina de la WHO Estandarizada.
COATRON M1 V1.07
16
PREPARACION A. Anticoagulante.
Se recomienda usar citrato de sodio, 3.8% o 3.2%.
B. Recolección de Plasma. 1. 2. 3. 4. 5.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico a 2-8°C. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
C. Reconstitución de Reactivos. Reconstituir con agua destilada con el volumen indicado en la etiqueta del frasco. Dejar a temperatura ambiente agitando en círculos ocasionalmente hasta que la solución se homogenice completamente. Estable por 7 días después de la reconstitución si se almacena de 2 - 8° C, evitar calentamiento prolongado. D. Preparación del COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5.
Encender el instrumento y esperar hasta que el LED esté encendido. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar PT como prueba activa. Checar la calibración Permitir que el reactivo se caliente por lo menos 5 minutos.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 25µL de plasma dentro de la cubeta. Precalentar el plasma por un minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50µL de tromboplastina precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “optic” otra vez) Si el instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no hay coagulación, en la pantalla aparecerá “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y INR.
PRUEBAS DE CALIBRACION Para la calibración INR de PT dos parámetros son requeridos. El valor normal (determine el valor normal de PT con el Plasma Normal.- rango esperado 11 – 14 s) COATRON M1 V1.07
17
El valor ISI (leer el valor ISI en la etiqueta del Reactivo). Introducir ambos valores en el COATRON M1.
CONTROL DE CALIDAD Se deben de usar plasmas controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RESULTADOS ESPERADOS DE LOS CONTROLES Control Normal Control A1 Control A2
0.8 – 1.3 INR 2.0 - 3.5 INR 5.0 – 8.0 INR
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
5.
DETERMINACION APTT.
RESUMEN Desde sus orígenes a través del trabajo de Langdell y sus colaboradores, y más tarde modificado por otros, el tiempo de prueba de Tromboplastina Parcial Activada ha sido muy usado por un muchos años como un ensayo de screening pre-quirúrgico para la evaluación de ciertos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con Heparina. Todos los factores del Vía Intrínseca son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo la prueba de APTT. Este es usado principalmente, sin embargo, para detectar deficiencias de Factores en la fase I, llamados Factores VIII, IX, XI y XII, así como el Factor Fletcher. La prueba APTT es también usada en el monitoreo de la Terapia con Heparina, mostrando resultados de pruebas prolongados aproximadamente 0.1 unidades y más. La prueba es también usada en la determinación cuantitativa (Pruebas de Factor) de Factores VIII, IX, XI y XII y Factor Fletcher. PRINCIPIO La Prueba APTT mide el tiempo de coagulación de plasmas de prueba después de la adición del Reactivo APTT, permitiendo después un “tiempo de activación”, seguido por la adición de cloruro de calcio. Las deficiencias de aproximadamente 40% y menor de Factores VIII, IX, XI y XII resultarán en una APTT prolongada. La presencia de Heparina en cantidades adecuadas de AT-III también resultará en una APTT prolongada. REACTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de Calcio
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PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras. 1. 2. 3. 4. 5.
C.
Usar un amortiguador de citrato de sodio, 3.8% o 3.2%. (Ver, por ejemplo, la Ref. 7).
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
Reconstitución del Reactivo. Llevar a Temperatura ambiente antes de usar. Mezclar bien con movimientos circulares o inversión y mantener una barra de agitación en el contenedor del reactivo durante su uso para evitar que el activador particulado se sedimente. Evite calentamientos prolongados.
D.
Preparación del COATRON M1. 1. 2. 3. 4.
Encender el Instrumento y esperar hasta que el LED esté prendido. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar PTT como prueba activa. Precalentar el CaCl2 al menos 5 minutos.
PRUEBA DE CALIBRACION Los resultados de APTT deberán normalizarse contra un valor normal, el cual es obtenido de un APTT de un Plasma Humano Normal.- ver el rango esperado en el instructivo de uso. Introducir el valor normal en el COATRON M1. El PTT es mostrado en segundos y en radio.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1 2 3 4 5 6 7 8.
Pipetear 25µL. de plasma dentro de la cubeta. Adicionar 25µL. de APTT al plasma. Incubar exactamente por 5 minutos. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar optico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 25 µL. de Cloruro de Calcio precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “optic” otra vez) El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta el coágulo, la pantalla mostrará “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y radio o razón.
CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control. COATRON M1 V1.07
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RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
6.
DETERMINACIÓN DE FIBRINOGENO.
La Enzima, Trombina, es la penúltima proteína en la secuencia de coagulación, actuando sobre el fibrinógeno soluble, y convirtiéndolo a fibrina insoluble. Los niveles de Fibrinógeno en plasma Normal tiene un rango de 200-400 mg/dL aunque niveles tan bajos como 10 - 20 mg/dLl pueden ocurrir en una hipofibrinogenemia congénita o adquirida. La determinación de niveles de fibrinógeno en plasma ha sido útil en el diagnóstico de enfermedades hemorrágicas relacionadas con el contenido de Fibrinónogeno en plasma, estas incluyen hiperfibrinogenemia, hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia y una fibrinogenemia.
PRINCIPIO El reactivo de FIBRINOGENO comercial utiliza el tiempo de coagulación de Clauss para la determinación de niveles de fibrinógeno en plasma, donde un exceso de trombina bovina se utiliza para coagular el plasma diluido. Primero se hace una curva estándar usando un plasma de referencia con un contenido de fibrinógeno conocido. Cuando la trombina es adicionada, el tiempo de coagulación obtenido es inversamente proporcional al contenido de fibrinógeno. Después el plasma del paciente diluido 1/10 se coagula con la trombina y el tiempo de coagulación resultante se interpola en la curva estándar. REACTIVO Reactivo de Fibrinógeno Buffer de Dilución (IBS) o Buffer de Owrens PREPARACION A. B. 1. 2. 3. 4. 5. C.
Anticoagulante.
Usar citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
Recolección de Muestras. Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando ocasionalmente con movimientos circulares hasta disolución completa. Estable por 5 días después de su reconstitución a 2-8 °C. Evitar el calentamiento prolongado.
D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución) COATRON M1 V1.07
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E. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que esté listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FIB como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PRUEBA DE CALIBRACIÓN Para la calibración del Fibrinógeno se requieren 2 (máximo 3) parámetros. El Tiempo de coagulación del Control Normal diluido 1:10, 1:20 y 1:40. Leer la concentración del fibrinógeno en la etiqueta del reactivo Una Calibración típica puede ser:
300 mg/dL = 9.2 seg 150 mg/dL = 25.0 seg 75 mg/dL = 38.0 seg
Introduzca todos los valores en el COATRON M1
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 50µL. de plasma diluido (1:10 con IBS) dentro de la cubeta. Precalentar el plasma 1 min. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar optic (presionar OPTIC) Adicionar 25µL. de trombina y simultáneamente presionar optic. (presionar “Optic” nuevamente) El instrumento leerá un máximo de 60 sec. Los resultados aparecerán en segundos y en mg/dL
CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
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7.
DETERMINACIÓN DE TIEMPO DE TROMBINA.
RESUMEN: La enzima trombina es la penúltima proteína en la secuencia de la coagulación, activando sobre el fibrinógeno soluble y convirtiéndolo en fibrina insoluble. Como reactivo, la Trombina ha demostrado ser útil en la evaluación de laboratorio de muchas enfermedades del fibrinógeno, incluyendo hipofibrinogenemia y disfibrinogenemia. Un tiempo prolongado de Trombina resultará en niveles de Fibrinógeno de cerca de 100 mg/dL y menores. Las móleculas de Fibrinógeno no funcional (disfibrinogenemia) ocasionarán un Tiempo de Trombina prolongado. La Heparina en presencia de cantidades adecuadas de AT-III, también originarán tiempos de trombina prolongados. REACTIVO Trombina Bovina PREPARACION A.
Anticoagulante.
Usar un citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
B.
Recolección de Muestras. 1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.
C.
Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado
D. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar TT como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. Pipetear 50µL de plasma dentro de la cubeta. 2. Precalentar el plasma por 1 minuto 3. Transferir la cubeta a la lectura de medición. 4. Activar optic (presionar OPTIC) 5. Adicionar 50µL de Trombina Bovina y simultáneamente nuevamente). 6. El instrumento leerá un máximo de 300 seg. 7. Los resultados aparecerán en segundos y en Ratio
presionar optic. (Presionar “Optic”
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ENSAYO DE CALIBRACION: Los resultados de TT se deben normalizar contra un valor normal, el cual se obtiene a partir de una TT de un Control Normal – rango esperado 13-17 seg. Introducir el valor normal al COATRON M1. El TT aparece en segundos y en radio. CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control. RESULTADOS ESPERADOS DEL CONTROL Control Normal
0.8 – 1.2 Radio
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
8. DETERMINACIÓN DE FACTORES EXTRÍNSECOS. (FACTORES II, V, VII Y X) RESUMEN
Las fallas de coagulación en la vía extrínseca se indica por los tiempos prolongados de PT. La actividad de un factor de la vía extrínseca ( Factores II, V, VII, X ) son determinados con UN PT del plasma de prueba mezclados con el plasma deficiente de factor. REACTIVOS Reactivo de Tromboplastina PLASMAS DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma
deficiente deficiente deficiente deficiente
F F F F
II V VII X
PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras.
1. 2. 3.
Usar un amortiguador de citrato de sodio, 38% o 32%.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. COATRON M1 V1.07
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4. 5. C.
Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacena en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo.
Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta del frasco. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)
E. 1. 2. 3. 4. 5.
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaEI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Pipetear 25µL de plasma diluido 1:10 dentro de la cubeta. Adicionar 25µL del plasma deficiente en la cubeta. Incubar por 1 minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50 µL de Tromboplastina precalentada y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “Optic” otra vez) El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá “+++.+s”. El resultado es mostrado en segundos y % de actividad.
ENSAYO DE CALIBRACION Para el % de actividad – calibración de un factor se requieren 2 (máximo 3) puntos de calibración. Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación. -1:10 Plasma diluido ( 100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido ( 10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido ( 5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS Determine el tiempo de coagulación para ambas muestras e introduzca los valores al Coatron M1. CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RESULTADOS ESPERADOS DEL CONTROL Control anormal 40 – 60% de actividad del factor. COATRON M1 V1.07
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RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
9. DETERMINACIÓN DEL FACTORES INTRÍNSECOS (Factores VIII, IX, XI, XII) RESUMEN
Las fallas de coagulación en la vía intrínseca se indican por tiempos prolongados de PTT. La actividad de un factor de la vía Intrínseca ( Factores VIII, IX, XI, XII ) son determinados con una PTT del plasma de prueba mezclados con el plasma deficientes de factor. RECTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de calcio PLASMA DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma
deficiente deficiente deficiente deficiente
F F F F
VIII IX XI XII
PREPARACION A.
Anticoagulante.
B.
Recolección de Muestras.
1 2 3 4 5 C.
Usar citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.
Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacena en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo.
Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.
Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)
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E. 1 2 3 4 5
Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.
PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. Pipetear 25µL de plasma diluido 1:10 dentro de la cubeta. Adicionar 25µL del plasma deficiente en la cubeta. Pipetear 50 µL de Tromboplastina Parcial Activada dentro de la cubeta. Incubar exactamente por 5 minutos. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). Adicionar 50 µL de Cloruro de Calcio precalentado y simultáneamente iniciar el óptico (presionar el botón “Optic” otra vez) 6. El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá “+++.+s”. 7. El resultado es mostrado en segundos y % de actividad. 1. 2. 3. 4. 5. 5.
Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación: -1:10 Plasma diluido (100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido (10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido (5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.
RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.
10. DETERMINACION DE DIMERO D RESUMEN
El antígeno Dímero D siempre esta presente en el plasma como resultado del rompimiento de la plasmina de la fibrina. Después de un daño, o cuando se sufre de condiciones asociadas con un incremento en la actividad hemostásica se presenta un incremento e la concentración plasmática de Dimero-D. La determinación del Dímero-D ha llegado a ser una ayuda importante en el diagnóstico de la trombosis. Niveles elevados de DímeroD se encuentran en condiciones clínicas tales como trombosis venosa profunda (DVT), embolismo pulmonar (PE) y coagulación intravascular diseminada (DIC)2. Un resultado de Dímero-D negativo en un paciente con una sospecha de desorden trombolítico tiene un gran valor predictivo negativo. COATRON M1 V1.07
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PRINCIPIO El reactivo de micro-partículas consiste de partículas de tamaño micro de poliestireno acopladas con anticuerpos monoclonales específicos para el Dímero-D. Cuando el reactivo se expone a la muestra de plasma, el Dímero-D aglutinará las partículas ocasionando un incremento en la dispersión de la luz. Cuando se expone a una longitud de onda apropiada de luz monocromática, el incremento medido como turbidez o dispersión, es proporcional a la cantidad de Dímero D en la muestra.
RECOLECCION DE LA MUESTRA Obtener una muestra de sangre mediante venopunción. Mezclar 9 volúmenes de sangre venosa con un volumen de una solución de citrato trisódico.
PRECAUCION Unicamente para uso de diagnóstico In-vitro. Para utilizarse únicamente por personal entrenado. MATERIAL REQUERIDO PERO NO PROVISTO Estándar para calibración de Dímro-D – 3200 ng/mL Control para Dímero-D – aproximadamente 250 ng/mL Solución Salina para dilución del calibrador y muestras
CONTROL DE CALIDAD Para mantener resultados consistentes, se recomienda que se prueben plasmas controles en intervalos de tiempo regulares. PROCEDIMIENTO PARA COATRON M1 1. Pipetear 25µL de plasma dentro de la cubeta. 2. Pipetee 100 µL de buffer de reacción en la cubeta. 3. Incube por 1-10 minutos. 4. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el botón “Optic”). 5. Adicionar 50 µL de Látex precalentado y mezcle bien durante los primeros 5 segundos. El mezclado se puede realizar con ayuda de la pipeta. 6. El instrumento leerá en los siguientes 150 segundos para determinar el cambio de señal. 7. El resultado es mostrado en extinción y concentración en ng/mL.
RESULTADOS Los resultados se reportan en concentración de Díimero-D (ng/mL). Como no existe un estándar internacional disponible para el Dímero-D, cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales y valores de corte.
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11. Servicio. PRECAUCION Favor de leer esta sección completamente antes de operar el COATRON M1. Con el objeto de asegurar precisión y un uso adecuado del instrumento. Sólo personal autorizado, deberá llevar a cabo cualquier función de servicio en el Coatron M1.
11.1.
Funciones de Servicio.
Para entrar al submenú oculto de servicio, presionar la tecla “Timer” y la “Entrar” simultáneamente.
ESPERAR PARA 37°C
Tecla “Tiempo” + “Enter”
PT:
CARGA PRESTABLECIDA? NO
000
El siguiente servicio podrá ser llevado a cabo en el Coatron M1.
Resetear los valores preestablecidos Ajustar temperatura Corrección – OD Corrección – Coag. Ajuste Optico. Fijar RS232.
Usar las teclas de los cursores para cambiar y la tecla “Entrar” para confirmar!
Los malos ajustes pueden influir decisivamente en la medición! cambio, ser consciente de las consecuencias !
Antes de cualquier
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Valores Preestablecidos: El Coatron M1 puede almacenar pruebas y parámetros de sistema permanente en el tablero. Calibración PT: Calibración PTT: Calibración PT: Calibración FIB:
ISI = 1.10 100 % (normal) – 12.8 seg. Normal = 30.0 s Normal = 15.0 s (1) 300 mg/dL = 9.2 seg (2) 150 mg/dL = 23.0 seg (3) 75 mg/dL = 36.0 seg
Calibración FaE:
(1) 100 % = 12.0 seg (2) 10 % = 35.0 seg (3) 5 % = 40.0 seg (1) 100 % = 32.0 seg (4) 10 % = 60.0 seg (5) 5 % = 70.0 seg (1) 1600 ng/mL = 150 mOD (2) 200 ng/mL = 30 mOD (3) 0 ng/mL = mOD
Calibración Fal: Calibración DD:
Corrección de Temperatura OD Corrección PT: OD Correción PTT: OD Corrección TT: OD Corrección FIB: OD Corrección PT: OD Corrección FaE: OD Corrección FaI: OD Corrección DD: Corrección de coag PT: Corrección de coag PTT: Corrección de coag TT: Corrección de coag FIB: Corrección de coag PT: Corrección de coag Fa-E: Corrección de coag Fa-I: Corrección de coag DD: Chequeo Optico: RS 232: Impresión de Resultados
25% = 25.0 seg.
°C = 369 (9119) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 (Dato->RS232 = NO)
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Ajuste de Temperatura: El incubador del Coatron M1 tiene una temperatura de 37°C. Cuando el LED VERDE está encendido, llene el tubo del reactivo con agua y colóquelo en la posición del reactivo. Colocar un termómetro en el tubo de reactivo y permita que se atempere por 10 minutos. Dejar calentar por 10 minutos y leer la temperatura.
Set temperature °C = 371 (9085)
Ejemplo: La temperatura actual de 37.1°C y el valor digital asignado es de 9085. Compare la temperatura que aparece en la pantalla y la del termómetro. Si la temperatura es diferente, ajústela presionando Up/Down. Espere hasta que la temperatura se estabilice a 37°C y aparezca en la pantalla del Coatron M1. Cheque y corrija el sistema de temperatura si no es equivalente a la del termómetro externo. Utilice las teclas UP / DOWN para incrementar o disminuir la temperatura
Termómetro
Tubo de reactivo, con aproximadamente 1 mL de agua
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Ajuste Optico: A.) Corrección OD.
OD – CORRECTION PT = 100 La medida de densidad óptica del instrumento se puede corregir mediante un factor para cada prueba. (OD-Correction = 100 densidad óptica * 1.00 -> no afecta) (OD-Correction = 120 densidad óptica * 1.20) OD-CORRECCION inferior a 100 causará: Mayores tiempos de coagulación. Reduce sensibilidad del método (más resultados como +++.+s) OD-CORRECCION superior a 100 causará: Menores tiempos de coagulación. Incremento de la sensibilidad del método, la cual puede causar resultados erróneos (resultados en menor tiempo ! ! ! !)
PRECAUCION: LA CORRECCION DE OD debe estar dentro de 50 -150 Especial: CORRECCION OD para prueba de Fibrinógeno. Corra un calibrador de 300 mg/dL. El resultado se debe de acercar a 10 segundos. Si esta por arriba/debajo de 10 segundos, incremente/disminuya la Corrección OD ligeramente. B.) Corrección de Coagulación. Con la corrección de coagulación el instrumento puede corregir el resultado para una mejor correlación con otro sistema. Ejemplo: En otro instrumento un plasma da un PT = 12.1 segundos, en el Coatron M1 el resultado es de 11.0 segundos. Para obtener resultados iguales, el resultado tiene que ser corregido por un factor 1.10 (+10%). Esto se puede hacer introduciendo en CORRECCION DE COAG = 110 (Factor 1.10).
CORRECCION DE COAG PT= 100
Chequeo Optico Se recomienda el chequeo óptico, si aumentan los problemas con las determinaciones. Retire la cubeta del óptico. CHEQUEO OPTICO
mw = 11323 004 El Coatron M1 ajusta este valor óptico (mw) a 11323 como una amplificación (amp) del nivel 4. Rango Control: (asegúrese de que la cubeta no esta colocada en el óptico) mw: 10000 – 13000 amp: 3-6 COATRON M1 V1.07
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Presione “menú” para repetir el chequeo óptico o presione UP/DOWN para cambiar la amplificación.
Interfase RS 232 La interfase puede usarse de dos maneras:
Modo de impresión Los resultados serán impresos. Modo debug La curva de reacción podrá ser visualizada en una PC.
DATA → RS232 NO (NO Modo de impresión; SI Modo Debug) El puerto de interfase esta colocado a 2400 Baud, 8 Bits, 1 paro, No paridad. Ejemplo de impresión de resultados:
01
PT:
Corrimiento # 1
PT:
Corrimiento # 2
PT:
Corrimiento # 3
PT:
Corrimiento # 4
12.5 s I = 1.03 02 13.2 s I = 1.35 03
04
12.8 s I = 1.22 12.6 s I = 1.04
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El Modo Debug Requerimientos:
- Computadora IBM (DOS). - Windows 95/98. - Lector software RS232 - Cable de servicio serial.
Figura. Pantalla del Lector RS232, el cual muestra una curva típica de coagulación. Remarcando: La curva puede almacenarse si el switch (almacenar) esta en posición de encendido (ON) La curva no será almacenada si el switch (almacenar) esta en posición de apagado (OFF) “Meβwet” = densidad óptica actual in mOD.
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11.2.
Guía de localización de averías.
Nota:
Siempre verifique que el instrumento ejecute apropiadamente las pruebas de muestras de control.
Mensaje de error de sistema
Falla óptica !
La medición no automáticamente
La medición erróneamente
inicia
inicia
LED Rojo de Servicio esta encendido LED Verde Listo esta apagado Temperatura no correcta +++.+s “No detecta el Coágulo”
Tiempo de coagulación muy corto
Tiempo de coagulación muy largo
Interpretación y acción correctiva
El Coatron M1 no está operando en su especificación óptica. Esto puede pasar, si: No hay suficiente luz (por ejemplo con reactivos muy turbios o muestras lipémicas). Cambiar el reactivo. Evitar muestras extremas. Hay luz intensa (por ejemplo luz directa del sol). Proteger contra la luz del sol. El láser LED está quemado. Remplazar el dispositivo. El cambio de señal es muy pequeño. Uso de reactivos muy claros (ej. Fibrinógeno, Trombina) Trate de pipetear fuerte y rápidamente o iniciar la medición presionando “Optic” al momento de adicionar. La señal sonora y temperatura pueden iniciar la determinación falsamente. Detenga la determinación y active el óptico brevemente antes de iniciar. El poder eléctrico no es suficiente. Usar el eliminador de poder original. Cargar la batería, si se usa. La temperatura está fuera de rango. Esperar unos minutos. Si el error persiste ar al servicio técnico. Ajustar la temperatura. Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes: El tiempo de coagulación es mayor que 300 segundos. El tiempo de coagulación es menor que 8 segundos. Reactivo Incorrecto El nivel de Fibrinógeno de la muestra es menor de 100 mg/dL (por ejemplo muestras diluidas). Burbujas de aire. Residuos en cubeta. Muestras recolectadas inadecuadamente OD-Correction esta puesto en cero. Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes Reactivo incorrecto. Burbujas de aire. Residuos en cubeta. Muestras recolectadas inadecuadamente Mal ajuste del óptico. Acción: Usar materiales recomendados. Ligera disminución del OD-Corrección Incremento del Rango – OD Siempre repetir la muestra para verificar resultados. Posibles razones incluyendo las siguientes Reactivos incorrectos. Burbujas de aire. Bajo nivel de Fibrinogeno. Muestras recolectadas inadecuadamente Mal ajuste óptico. Acción: Usar materiales recomendados. Ligera disminución del OD-Corrección Disminución del Rango – OD COATRON M1 V1.07
34
12. Partes que componen el aparato. Parte
Contenido No. correspondiente al dibujo
Cubierta
1
1, 2, 3
Fuente de poder 90-264 Vac EU
1
No aparece en el dibujo
Fuente de poder 90-264 Vac USA
1
No aparece en el dibujo
Tablero
1
4
Pantalla
1
12
Sistema a bordo
1
11
Transmisor
1
10
Receptor
1
9
Placa de Montaje
1
5
Distancia M3x16
1
29
Distancia D6xH3
1
18
Bloque Optico
1
8
Placa metálica de calor
1
13
Sensor de Temperatura
1
17
Cable RS232
1
14
Cable de salida DC
1
15
Bloque de calor
1
6
Manual de Operación
1
No aparece en el dibujo
Garantía
1
No aparece en el dibujo
COATRON M1 V1.07
35
13. Imagen Técnica (3era. Dimensión)
COATRON M1 V1.07
36
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