Practica 6 Colimetria 1a3j2f

Universidad Nacional “Pedro Ruiz Gallo”

Facultad de Ciencias Biológicas Curso: Microbiologia acuatica Docente : Olga Francia Alumna: Chapoñan Coronado Rosa Jhaqueline

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PRÁCTICA Nº6 COLIMETRIA DE AGUA POTABLE. TÉCNICA DE TUBOS MÚLTIPLES. COLIFORMES FECALES. I.

INTRODUCCION:

El agua de calidad apta para consumo humano cuando entra al sistema de distribución,

puede

contaminarse

a

través

de

conexiones

cruzadas,

retrosifonaje, rotura de las tuberías del sistema de distribución, conexiones domiciliarias, cisternas y reservorios defectuosos, grifos contraincendios dañados y durante el tendido de nuevas tuberías o reparaciones realizadas sin las mínimas medidas de seguridad (OMS, 1985; OMS, 1995; VARGAS, 1996). Asimismo defectos en la construcción o en las estructuras de pozos, depósitos, ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones son causas que predisponen el ingreso y proliferación de microorganismos desde distintas fuentes (GOYA, 1997). Además existen factores secundarios que permiten el crecimiento de microorganismos en el agua dentro de los sistemas de distribución y almacenamiento como: cantidad y tipo de nutrientes, oxígeno, temperatura, pH, concentración de desinfectante y material de las tuberías (GALARRAGA, 1984). Las bacterias del grupo de los coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45 ºC se conocen como coliformes termotolerantes. Se considera que Escherichia coli es el índice de contaminación fecal más adecuado. En la mayoría de las circunstancias, las poblaciones de coliformes termotolerantes se componen predominantemente de E. coli; por lo tanto, este grupo se considera un índice de contaminación fecal aceptable, pero menos fiable que E. coli. La determinación de coliformes se usa como indicador de la eficacia del tratamiento (CACERES, 1990). Los coliformes fecales (termorresistentes) se definen como el grupo de organismos coliformes que pueden fermentar la lactosa a 44°-45°C, comprenden el género Escherichia y en menor grado, especies de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter (EASTON, 1998). Los coliformes termorresistentes distintos de E. coli pueden provenir también de aguas orgánicamente enriquecidas, por ejemplo de efluentes industriales o de 2

materias vegetales y suelos en descomposición. Como los organismos coliformes termoresistentes se detectan con facilidad, pueden desempeñar una importante función secundaria como indicadores de la eficacia de los procesos de tratamiento del agua para eliminar las bacterias fecales (OMS, 1995). II.

OBJETIVOS:  Determinar la calidad microbiológica del agua.  Aplicar en método del Numero Más Probable (NMP)

III.

MATERIALES:

Muestra: 

Agua de grifo

Medios 

5 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado con



campanas de Durhan 10 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa concentrado simple con

      IV.

campana de Durhan Agar Endo para confirmar termotolerantes Tubos con caldo EC con campana de Durhan Pruebas para IMVIC Pipetas de 1 y 10ml Estufa Gradilla PROCEDIMIENTO: Se utilizó el Método del Numero Más Probable (NMP)

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 

Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua antes de verter en placa.

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*PRUEBA

PRESUNTIVA-

COLIFORME TOTALES 1. Tomar 10ml de la muestra de agua y agregarle a la primera serie de tubos con 10 ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado. 2. Después tomaremos 1ml de la muestra de agua y le agregaremos a la segunda serie de tubo con 10ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa concentración simple. 3. Y por último tomaremos 0.1ml de la muestra y lo diluimos en 10ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa concentración simple. 4. Homogenizar e Incubar a 35oC por 24h a 48h

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LECTURA: Si se observa producción de gas y turbidez: La prueba se considera positiva, debiendo anotar el número de tubos positivos para posteriormente hacer el cálculo del NMP.

PRUEBA CONFIRMATIVA 1. Todos los tubos gas positivos sembrarlos en agar ENDO. 2. Incubar a 35°c por 24h a 48h

LECTURA: Los lactosa positivos y con brillo metálico. *COLIFORMES FECALES TERMOTOLERANTES 1. De los tubos gas positivos de Caldo Laurin Sulfato Triptosa, tomar una asada y sembrarlos en tubos que contiene caldo E.C. 2. Incubar a 45oC por 24h.- 48h.

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LECTURA: Se observara la turbidez y gas.

V.

RESULTADOS PARTE INFORMATIVA DE LA MUESTRA      

MUESTRA: agua de grifo. LUGAR: MUESTREADOR: FECHA: 8 de octubre HORA: CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS: Color límpio, sin olor característico, pocas partículas en suspensión. Sin sedimento

1.-COLIFORMES TOTALES

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10ml

0.1ml 1ml

Nº tubos positivos

5 4

0

Codigo de Presuntivo de Numero mas Probable es: 5-4-0 2.- PRUEBA CONFIRMATIVA Al realizar la lectura en agar ENDO, el Codigo de Confirmativo de Numero más

Probable es: 3-2-0, incluyendo algunas diluciones

que tambien dieron positivos para E.Coli, por el brillo metalico caracteristico

3.- COLIFORMES TERMOTOLERANTES 7

Codigo de Presuntivo de Numero mas Probable fue de: 2-0-0

VI.-INTERPRETACIÓN : El limite establecido en el Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo Humano - DS N° 031-2010-SA - Dirección General de Salud Ambiental Ministerio de Salud, en el artículo 60°, el cual es <1,8 NMP/100ml.  Coliformes totales. Código NMP: 5-4-0, Contiene 130 NMP/100ml.  Coliformes termotolerantes. Código NMP: 2-0-0, Contiene 4 NMP/100ml.  Prueba confirmativa. Código NMP: 3-2-0, Contiene 14 NMP/100ml. VII.-CONCLUSIÓN •

Se aprendió a utilizar correctamente la técnica del Numero Más Probable.

• Se determinó que la calidad del agua no es apta para el consumo humano debido a que la presencia de coliformes totales sobre pasa el límite establecido en el Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo Humano DS N° 031-2010-SA - Dirección General de Salud Ambiental - Ministerio de Salud, en el artículo 60°, el cual es <1,8 NMP/100ml.

ANEXOS

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Cuadro N° 2 NMP y límites de confianza de 95% cuando se usan diversas combinaciones de resultados positivos de series de 10, 1 y 0.1 ml. en series de 5 tubos NÚMERO DE TUBOS CON REACCIÓN POSITIVA

10 ml 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

1 ml 0 0 1 2 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 3 0 0 1 1 2 2 0 0 1 1 1 2 2 3 3 4 0 0 0 1 1 1 2 2 2 3

0.1 ml. 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 2 0 1 0 1 0 0 1 2 0 1 2 0 1 2 0

INDICE DE NMP/100 ml <2 2 2 4 2 4 4 6 6 4 7 7 9 9 12 8 11 11 14 14 17 13 17 17 21 26 22 26 27 33 34 23 30 40 30 50 60 50 70 90 80

LIMITE DE CONFIANZA DE 95%

Inferior --1 1 1 1 1 1 2 2 1 2 2 3 3 5 3 4 4 6 6 7 5 7 7 9 12 9 12 12 15 16 9 10 20 10 20 30 20 30 40 30

Superior --10 10 13 11 15 15 18 18 17 20 21 24 25 29 24 29 25 35 35 40 38 45 46 55 63 56 65 67 77 80 86 110 140 120 150 180 170 210 250 250 9

5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5

1 2 3 0 1 2 3 0 0 1 2 3 4 5

110 140 170 130 170 220 280 350 240 300 500 900 1600 > 1600

40 60 80 50 70 100 120 160 100 100 200 300 600 ---

300 360 410 390 480 580 690 820 940 1300 2000 2900 5300 ---

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